A „Reagenskészlet a Rhesus-rendszer antigének és antitesteinek meghatározására emberi vérben” alkalmazásáról
(AGS for Coombs teszt)
TU 9398-102-51203590-2012
RU No. RZN 2013/1255, 2013.10.11.
I. BEVEZETÉS
A Coombs-teszthez használt standard szérum specifikus heteroimmun antitesteket tartalmaz emberi vérfehérjék ellen, és kétféle reakcióban használható – a közvetlen és közvetett Coombs-tesztben.
Közvetlen Coombs-teszt Az eritrociták in vivo szenzibilizációjának meghatározására használják újszülöttek hemolitikus betegségében és krónikus hemolitikus anémia autoimmun formájában, valamint néhány egyéb állapotban. Közvetlen Coombs-teszt elvégzése abból áll, hogy a Coombs-teszthez szérumot adnak a vizsgált vörösvérsejtekhez, amelyeket előzőleg kimostak saját plazma fehérjéiből. Ha a vörösvérsejteket in vivo szenzitizálták, a reakció agglutinációt eredményez.
Közvetett Coombs-teszt tesztként használják a szervezet szenzibilizációs állapotának azonosítására, lehetővé téve a vizsgált személy vérszérumában szabad állapotban lévő antitestek kimutatását; a transzfundált vér kompatibilitásának vizsgálataként, amikor a recipiens szérumának a szándékolt donor vörösvértesteire gyakorolt hatását vizsgálják; és tesztként különböző csoportantigének meghatározására eritrocitákban, ismert specifitású antitesteket tartalmazó standard szérumokkal való előzetes expozíció alkalmazásával. Közvetett Coombs-teszt (minden lehetőség) előállított két szakaszban, amelyek közül az első a teszt (vagy standard) szérum standard (vagy teszt) eritrocitákkal történő inkubálása, azaz az eritrociták in vitro szenzitizálása. A második szakasz a tényleges reakció a szérummal a Coombs-teszthez, amelyet ugyanúgy hajtanak végre, mint a közvetlen Coombs-teszt.
A reakció végeredménye mind a közvetlen, mind a közvetett Coombs-tesztben a Coombs-teszthez használt standard szérum és a vörösvértesteken rögzített antitestek (humán vérfehérje) kölcsönhatása miatt következik be. Ez az eredmény a vörösvértestek agglutinációjában nyilvánul meg. Az agglutináció megfigyeléséhez használjon fehér porcelánt vagy bármilyen nedvesíthető felületű fehér tányért, hogy a rávitt cseppek jól elkeveredjenek és ne terüljenek szét a tányér felületén. Az összekevert cseppeket enyhén eloszlatjuk a tányéron, körülbelül egy 2 kopejkás érme méretűre.
II. A REAKCIÓ ÖSSZETEVŐK ELŐKÉSZÍTÉSE
A benne lévő antitestek jelenlétének és specificitásának meghatározására szolgáló tesztszérumot a vizsgált személy véréből nyerik, tartósítószer hozzáadása nélkül. + 4-8 0 C hőmérsékleten legfeljebb 2 napig, vagy fagyasztva 1 hónapig tárolandó.
A kompatibilitási vizsgálathoz használt szérumot ugyanúgy kapják meg, de legfeljebb 2 nap eltarthatósággal használják.
A bennük lévő bizonyos izoantigének meghatározására szolgáló vörösvértesteket valamilyen tartósítószerrel állítják elő attól a személytől, akinek a vérét vizsgálják. A vörösvértest-üledéket is használhatja tartósítószer nélkül vett vérből.
A kompatibilitás vizsgálatakor donorvért használnak, amelyet egy tűn keresztül szívnak át a transzfúzióra előkészített injekciós üvegből.
Minden esetben a vörösvértesteket kémcsövekben 3-4 alkalommal mossák ki a plazmából úgy, hogy egy térfogat vörösvértesthez 8-10 térfogat izotóniás nátrium-klorid-oldatot adnak, majd keverik és centrifugálják 1500-2000 fordulat/perc sebességgel 5 percig. 10 percig (a vörösvértestek teljes ülepedéséig). Minden centrifugálás után a felülúszót leszívjuk.
III. REAKCIÓTECHNIKÁK
A vizsgált eritrocitákat 5%-os szuszpenzió formájában állítjuk elő, amelyhez egy csepp négyszer mosott eritrocitát kémcsőben 19 csepp izotóniás nátrium-klorid oldattal keverünk össze.
Egy csepp (0,05 ml) 5%-os vörösvérsejt-szuszpenziót egy fehér lemezre viszünk, és megkenjük. A lemezt megrázzuk, és 3 percig figyeljük, hogy lássuk, nem történt-e vörösvértest-agglutináció. Ha agglutináció nem történt, akkor adjunk hozzá 1-2 csepp standard szérumot a Coombs-teszthez, alaposan keverjük össze a cseppeket, majd enyhén rázzuk fel a lemezt, majd hagyjuk állni egy-két percig és rázzuk újra. Ezzel egyidejűleg az eredményt 10 percig figyeljük, ami agglutináció jelenlétében vagy hiányában fejeződik ki.
A közvetlen Coombs-teszt eredményeinek értelmezése.
Nincs agglutináció - negatív teszt
Agglutináció jelenléte
– pozitív teszt, amely a vizsgált vörösvértestek szenzibilizációját, azaz a rajtuk lévő antitestek felszívódását jelzi, ami in vivo történt az emberi szervezetben (újszülött, beteg). Ha a vizsgált vörösvértestek agglutinációja hozzáadása előtt történt a szérum a Coombs-teszthez a közvetlen teszt eredményét nem veszi figyelembe.
2. Közvetett Coombs-teszt
A vizsgált személy vérszérumában lévő izoantitestek kimutatására szolgál
Olyan esetekben alkalmazzák, amikor ki kell deríteni, hogy egy beteg, terhes nő, donor stb. vére tartalmaz-e hiányos formájú izoimmun antitesteket, és meg kell állapítani ezek specifitását. A reakcióhoz a vizsgált személy vérszérumát és ismert specifitású standard vörösvértesteket használnak. A 8-10 vagy több vörösvérsejt-minta között különbségek lehetnek a többi rendszerhez képest, és nagyon fontos, hogy ezen faktorok mindegyike szerepeljen legalább egy vörösvérsejt-mintában. A panel Rh-negatív vörösvértestek mintáit is tartalmazza különféle kombinációk más rendszerek antigénjei, így közöttük van Duffy-pozitív és Duffy-negatív, amelyek viszont Kell-pozitív és Kell-negatív, Kidd-pozitív és Kidd-negatív stb. , ha lehetséges, vegye figyelembe annak a személynek a vörösvértesteit, akinek a szérumát a reakcióban tesztelik.
Reakció technika
Állványon több, 3-10 ml térfogatú centrifuga vagy egyéb cső van elhelyezve, a reakcióba bevont eritrocita minták számának megfelelően. A csöveket felcímkézzük, és a jelölésnek megfelelően 1 kis csepp (0,01 ml) mosott standard vörösvértestet adunk hozzájuk. Minden kémcsőbe három csepp tesztszérumot csepegtetünk, a kémcsöveket erőteljesen összerázzuk, hogy a vörösvértestek összekeveredjenek a szérummal, és 45 percre 37 0 C-os termosztátba helyezzük. Az inkubálás után a csöveket eltávolítjuk a termosztátról, és a vörösvértesteket mossuk úgy, hogy izotóniás nátrium-klorid oldatot adunk a cső tetejére, keverjük, majd centrifugáljuk. A mosást 3-4 alkalommal megismételjük, minden alkalommal óvatosan kiszívva a felülúszót, majd 2 csepp izotóniás nátrium-klorid oldatot adunk a megmosott vörösvértestekhez, hogy a szuszpenzió körülbelül 5%-át kapjuk (centrifugacsövek használatakor korlátozhatja magát kétszeri mosáshoz).Minden kémcsőből 1 csepp 5%-os vörösvérsejt-szuszpenziót viszünk át egy fehér lemezre, 1-2 csepp standard szérumot adunk a Coombs-teszthez, és a szérumot alaposan összekeverjük az eritrocitákkal. A lemezt enyhén megrázzuk, majd 1-2 percig magára hagyjuk, és ismételten ismételten megrázzuk, miközben egyidejűleg 20 percig figyeljük a reakció eredményét.
Az eredmények értelmezése
Nincsenek agglutináció jelei (negatív eredmény) minden mintában azt jelenti, hogy a vizsgálati szérum nem tartalmaz hiányos antitesteket a vizsgálatba bevont standard vörösvértestekben található csoportantigénekkel szemben.Ha néhány vagy a legtöbb cseppben a kontrollon kívül, megfigyelt agglutináció , ez azt jelenti, hogy a tesztszérum hiányos vörösvértest-antigének elleni antitesteket tartalmaz. Ezen antitestek specificitásának kérdését a pozitív és a negatív reakciók a reakcióba bevont vörösvértestek antigén szerkezetével. Ezen antitestek aktivitásának kérdését titrálással oldjuk meg.
1. példa Agglutináció minden Rh 0 (D) faktort tartalmazó eritrocita mintánál előfordult, függetlenül a rendszer és más rendszerek egyéb faktorainak meglététől vagy hiányától, míg az összes Rh 0 (D) - negatív mintánál agglutináció nem volt megfigyelhető (tehát függetlenül más tényezők jelenlététől vagy hiányától) - ez azt jelenti, hogy a tesztszérum hiányos Rhesus elleni antitesteket tartalmaz - Rh 0 (D).
2. példa. Agglutináció minden Duffy-faktort tartalmazó vörösvértest-mintánál előfordult, függetlenül a Rhesus-rendszer és más rendszerek antigénjeinek jelenlététől vagy hiányától, míg az összes Duffy-negatív mintánál nem volt megfigyelhető agglutináció, ami azt jelenti, hogy a tesztszérum hiányos anti- antitestek -Duffy.
Kiegészítés. Ha az intézmény nem rendelkezik teljes standard vörösvértest-panellel, de szükség van a szérum vizsgálatára az antitestek jelenlétére vonatkozóan, akkor javasolt egy vizsgálatot végezni egészséges egyénektől származó, véletlenszerűen kiválasztott vörösvértestek 25-30 mintájával. 0. csoport (I) vagy a tesztszérummal azonos nevű szérum. Ez lehetővé teszi az Rh-Hr, Duffy, Kell, Kidd rendszer legtöbb antigénjével szembeni antitestek jelenlétének vagy hiányának a kérdésének megoldását.
Ha pozitív eredményt kapunk, a kimutatott antitestek specifitására vonatkozó további következtetéseket egy speciális, standard vörösvértestek teljes paneljével végzett vizsgálat döntheti el.
3. A közvetett Coombs-teszt elvégzésének technikája a transzfundált vér kompatibilitásának vizsgálatára
A vérátömlesztés közbeni inkompatibilitás elkerülése érdekében a következő kompatibilitási teszteket kell elvégezni a transzfúzió előtt:
Az ABO vércsoportok kompatibilitási tesztje, amelyet szobahőmérsékleten, síkon végeznek.
Rh faktor és más izoantigének kompatibilitási tesztjei.
Egy kis (0,01 ml) csepp mosott donor eritrocitát, amelyet a transzfúzióra szánt vérpalackból tűn keresztül vettünk, egy 3-4 ml térfogatú centrifuga vagy más cső aljára csepegtetünk, és 3 csepp a páciensből. szérumot adnak hozzá. A kémcsövet megrázzuk, hogy az eritrociták összekeveredjenek a szérummal, majd 45 percre 37 0 C-os termosztátba helyezzük. Inkubálás után izotóniás nátrium-klorid oldatot adunk a kémcső tetejére, a kémcső tartalmát összekeverjük és 5-10 percig centrifugáljuk. Ezt a vörösvértest-mosást háromszor megismételjük, minden alkalommal óvatosan eltávolítva a felülúszót. Centrifugacsövek használatakor korlátozhatja magát a kétszeri mosásra. Adjon hozzá 2 csepp izotóniás nátrium-klorid oldatot a mosott vörösvértestekhez, hogy körülbelül 5%-os szuszpenziót kapjon.
1 csepp 5%-os vörösvértest-szuszpenziót egy fehér tányérra viszünk, 1-2 csepp Coombs-teszthez használt standard szérumot adunk oda, és a szérumot alaposan összekeverjük a vörösvértestekkel. Ezután a tányért enyhén megrázzuk, 1-2 percig magára hagyjuk, majd ismételten rendszeresen megrázzuk, miközben 20 percig figyeljük az eredményt.
Jegyzet: Rh-inkompatibilitás esetén az agglutináció általában az első percben megtörténik, de alacsony Rh-antitest (vagy más antitest) titer esetén később, esetenként a huszadik percben előfordulhat agglutináció.
Az eredmény értelmezése:
Agglutinátumok láthatók csomók formájában tiszta vagy teljesen kifehéredett alapon - ez azt jelenti, hogy a donor vére összeegyeztethetetlen a recipiens vérével, és nem transzfundálható neki.
Hiány az agglutináció jelei azt jelentik, hogy a páciens vére nem tartalmaz hiányos antitesteket a donor vörösvérsejtjeivel szemben az Rh-faktorral és más izoantigénekkel szemben, amelyek ellen inkomplett antitestek képződhetnek.
A közvetett Coombs-teszt csak a hiányos antitestekre érzékeny.
4. Indirekt Coombs-teszt technika az eritrociták antigénszerkezetének meghatározására
Ezt a mintát használják annak meghatározására, hogy van-e vagy hiányzik csoportos antigén eritrociták standard szérum felhasználásával, amely a megfelelő antitesteket hiányos formában tartalmazza.
Leggyakrabban az indirekt Coombs-tesztet a Kell (K), Duffy (Fy), Kidd (Jk) antigének meghatározására, valamint az Rh rendszer gyenge antigénjének (Du) meghatározására használják.
Mielőtt folytatná az antigének meghatározását, a vizsgált vörösvértesteket közvetlen Coombs-teszttel kell tesztelni. Ha a közvetlen teszt eredménye pozitív, az antigének közvetett Coombs-teszttel történő meghatározása nem végezhető el, és erre a célra más reakciókat kell alkalmazni.
A reakcióhoz 3-4 ml térfogatú centrifugát vagy egyéb csöveket használunk három mennyiségben: egyet a vörösvértestek vizsgálati mintájára, kettőt pedig 1 kis (0,01 ml) csepp háromszor mosott vörösvértesthez adunk. az első cső alján a kontroll eritrocitákat a második csőbe, amely tartalmazza a kívánt antigént (például Duffy-pozitív), és a harmadik csőbe - negatív kontroll (Duffy-negatív). Adjon 2-3 csepp standard szérumot (ebben a példában anti-Duffy) minden kémcsőhöz. A kémcsöveket összerázzuk, hogy a tartalom összekeveredjen, és 45 percre 37 0 C-os termosztátba helyezzük. Az ilyen inkubálás után a kémcsöveket kivesszük a termosztátból, a tetejére izotóniás nátrium-klorid-oldatot adunk, a tartalmat alaposan összekeverjük és 1500-2000 ezer ford./perc sebességgel 5-10 percig centrifugáljuk. Centrifugálás után a felülúszót óvatosan leszívjuk, és a vörösvértestek mosását négyszer megismételjük. (Centrifugacsövek használatakor korlátozódhat a kétszeri mosásra).
Adjon hozzá 2 csepp izotóniás nátrium-klorid oldatot a mosott vörösvértestekhez, hogy körülbelül 5%-os szuszpenziót kapjon. Minden kémcsőből 1 csepp 5%-os eritrocita-szuszpenziót viszünk át egy fehér lemezre, minden egyes csepp vörösvértesthez 1-2 csepp standard szérumot adunk a Coombs-teszthez, és összekeverjük. A lemezt enyhén megrázzuk, majd 1-2 percig magára hagyjuk, és ismételten ismételten megrázzuk, miközben egyidejűleg 20 percig figyeljük a reakció előrehaladását.
Az eredmények értelmezése
Agglutináció jelenléte vörös vérsejtek ( pozitív eredmény) azt jelenti, hogy a vér tartalmazza a kívánt antigént (ebben a példában Duffy-pozitív vér).
Nincs agglutináció (negatív eredmény) azt jelenti, hogy a vizsgált vér nem tartalmazza a kívánt antigént (Duffy negatív).
Az eredményt a rendszer igaznak tekinti a kontrollminták ellenőrzése után, azaz a példában, ha az eredmény pozitív a Duffy-pozitív mintával és negatív a Duffy-negatív mintával.
5. Kiadási űrlap
A reagens folyékony formában, 5 vagy 10 ml-es palackokban kapható (1 ml 10 adagot tartalmaz). A nátrium-azidot tartósítószerként 0,1%-os végső koncentrációban használják.
6. Tárolás
Felhasználhatósági időtartam: két év hűtőszekrényben 2-8°C-on. A felbontott palack a lejárati időn át, hűtőszekrényben, hermetikusan lezárva használható.
A reklamáció okai: tevékenység hiánya, nem specifikusság, a palack sértetlenségének megsértése, pelyhek jelenléte, lejárt reagens. Reklamációnál kérjük feltüntetni az átvétel dátumát, a szállítót (ha a terméket nem a gyártótól kapta), a tételszámot, valamint a reagens alkalmatlanságának okát. Kérjük, csatoljon egy jegyzőkönyvet a reagens tesztelésének eredményeivel és 2-3 bontatlan palackkal a reagenssel
A panaszt a gyártó LLC "MEDICLON" címére kell elküldeni: 127276
Vagy plazmában oldva.
Szinonimák: antiglobulin teszt, Coombs teszt, AGT, közvetett/direkt antiglobulin teszt, IAT, NAT, DAT, indirekt/direkt Coombs teszt
Coombs teszt az
olyan elemzés, amely kimutatja az immunizálást és a vörösvértestek elleni antitesteket.
A Coombs-teszt típusai
- közvetlen Coombs-teszt– kimutatja a vörösvértestek felületén rögzített antitesteket. Autoimmun hemolitikus anémia gyanúja esetén, hemolízis autoimmun betegségekben, gyógyszerek (metildopa, penicillin, kinin) bevétele után, vérátömlesztés és az újszülött hemolitikus betegsége után végezzük.
A vörösvértesteket in vivo szenzitizálták – az antitestek már szilárdan kötődnek hozzájuk, és az antiglobulin szérum (anti-IgG) hozzáadása hatására az érzékenyített sejtek összetapadnak, ami szabad szemmel is látható.
- közvetett Coombs-teszt– vörösvértest ellenes antitestek kimutatása a vérplazmában, vérátömlesztés előtt és terhesség alatt.
Az anti-eritrocita antitestek az autoantitestek egy fajtája, pl. antitestek a saját szövetei ellen. Autoantitest akkor fordul elő, ha az immunrendszer abnormálisan reagál bizonyos gyógyszerekre, például nagy dózisú penicillinre.
Felületükön a vörösvértestek különféle kémiai struktúrákat (glikolipideket, szacharidokat, glikoproteineket és fehérjéket) tartalmaznak, az orvostudományban ún. antigének. Egy személy a szüleitől örököl egy specifikus antigéntérképet minden egyes vörösvértesten.
Az antigéneket csoportokba vonják és e mellett a vért több csoportra osztják - aszerint AB0 rendszer, Rhesus, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Az orvos munkájában a leghíresebb és legjelentősebb az AB0 és az Rh-faktor (Rh).
AB0 rendszer
Rhesus-hovatartozás egy személyt ezeknek az antigéneknek a jelenléte határozza meg. Az eritrociták különösen fontos antigénje a D antigén. Ha jelen van, akkor Rh-pozitív vér RhD-ről beszélnek, ha pedig nincs jelen, akkor Rh-negatív Rhd-ről beszélnek.
Ha a megfelelő antitest az eritrocita antigénekhez kötődik, az eritrocita elpusztul - hemolizál.
Használati javallatok közvetlen antiglobulin teszt
- primer autoimmun hemolitikus anémia
- hemolitikus vérszegénység autoimmun, daganatos, fertőző betegségekben
- gyógyszer okozta autoimmun hemolitikus anémia
- transzfúzió utáni hemolitikus anémia (napok - hónapok)
- újszülött hemolitikus betegsége (az egyik vércsoport összeférhetetlensége)
Használati javallatok indirekt antiglobulin teszt
- vérátömlesztés előtt
- Rh-negatív nő terhessége alatt
Autoimmun hemolitikus anémia
Autoimmun hemolitikus anémia (elsődleges)– klasszikus autoimmun betegség, melynek oka ismeretlen. Feltételezhető, hogy az immunrendszer szintjén zavar lép fel az interakciós folyamatban, ami a saját vörösvértestek idegenként való észleléséhez vezet. A sejtek IgG osztályú (t 37°C-on reagálnak) és/vagy IgM (t 40°C-on) antitesteket termelnek, amelyek csatlakoznak az eritrocita felszínéhez, számos enzimet (a komplementrendszert) indítanak el, és „perforálják” az az eritrocita fala, ami annak pusztulásához vezet - hemolízis.
A hemolitikus anémia tünetei
- fáradtság, általános gyengeség, ingerlékenység
- nehézlégzés
- hasi fájdalom, hányinger
- sötét vizelet színű
- hátfájás
- a bőr és a nyálkahártyák icterikus elszíneződése
- megnagyobbodott máj, lép
- a vörösvértestek számának és a hemoglobinnak a csökkenése általános vérvizsgálat során
Pozitív eredmény egyenes Coombs tesztek 100%-ban megerősíti az autoimmun hemolitikus anémia diagnózisát, igazolva annak autoimmun eredetét. Ugyanakkor a negatív eredmény nem teszi lehetővé a diagnózis eltávolítását.
Másodlagos autoimmun hemolitikus vérszegénység és pozitív Coombs-teszt a következő betegségekben fordulhat elő:
- szisztémás lupus erythematosus
- Evans szindróma
- Waldenström makroglobulinémia
- paroxizmális hideg hemoglobinuria
- krónikus limfocitás leukémia
- limfóma
- Fertőző mononukleózis
- Mycoplasma pneumoniae fertőzés
- szifilisz
A pozitív antiglobulin teszt ezekre a betegségekre nem szolgál diagnosztikai kritérium, hanem a betegség egyik tünete.
Az újszülött hemolitikus betegsége
Ok újszülöttek hemolitikus betegségei - az anya és magzat vércsoportjainak inkompatibilitása, a legtöbb esetben Rh rendszer szerint, egyedi esetekben - AB0 rendszer szerint, kazuisztikusan - egyéb antigének szerint.
Rh-konfliktus akkor alakul ki, ha egy Rh-negatív nő magzata Rh-pozitív vért örököl az apjától.
A betegség újszülöttben csak akkor alakul ki, ha az anyában már kialakultak a megfelelő antigénekkel szembeni antitestek, ami korábbi terhességek, szülés, abortusz, transzfúzió után következik be. összeférhetetlen vér. A legtöbb gyakori ok az eritrocita membrán antigénjei elleni antitestek szintézisének kiváltása - szülés (magzati anyai vérzés). Az első szülés általában komplikációk nélkül megy végbe, de a későbbiek az újszülött hemolitikus betegségével járnak a születést követő első napokban.
Az újszülött hemolitikus betegségének tünetei
- a bőr sárgasága
- anémia
- a bőr és a nyálkahártyák sápadtsága
- megnagyobbodott máj és lép
- légzési gondok
- egész test duzzanata
- a központi idegrendszer izgalma és fokozatos depressziója
Anémia vérátömlesztés után
Közvetett Coombs-teszt vérátömlesztés előtt végezzük el a kompatibilitás felmérését, és közvetlen Coombs-teszt- utána, ha transzfúzió utáni hemolízis gyanúja merül fel, pl. ha olyan tünetei vannak, mint láz, hidegrázás, öntözés (lásd alább). Az elemzés célja a transzfúziós vörösvértestek elleni antitestek azonosítása, amelyek a recipiens vörösvérsejtjéhez kötődtek, és a transzfúzió utáni hemolízis okozói, valamint a donor vörösvértestek idő előtti eltávolítása a vérkeringésből. a recipiens (aki a vért kapta).
A hemolitikus reakció tünetei vérátömlesztés után
- a testhőmérséklet emelkedése
- bőrkiütés
- hátfájás
- a vizelet vörös színe
- hányinger
- szédülés
A Coombs-teszt dekódolása
Érdemes emlékeztetni arra, hogy a direkt és indirekt antiglobulin tesztek megfejtésének alapvető szabályai megegyeznek. Az egyetlen különbség az antitestek elhelyezkedése - a vérben vagy már a vörösvértesteken - a vörösvértesteken.
- Ha a közvetlen Coombs-teszt negatív- ez azt jelenti, hogy az antitest nem „ül le” a vörösvértestekre, és a tünetek okát tovább kell keresni és elvégezni közvetett minta Coombs
- ha a Coombs-teszt pozitív eredménye vérátömlesztés, fertőzés, gyógyszeres kezelés után - a pozitivitás akár 3 hónapig is eltarthat (a vörösvértestek élettartama 120 nap - 3 hónap)
- egy autoimmun betegség pozitív antiglobulin teszt eredménye hónapokig vagy akár évekig is eltarthat
Coombs teszt szabványok
- közvetlen Coombs-teszt- negatív
- közvetett Coombs-teszt- negatív
A minőségileg pozitív eredményt a pluszok számában mérjük egytől négyig (+, ++, +++, ++++), mennyiségileg pedig digitális formában - 1:16, 1:256 stb.
4 tény a Coombs-tesztről
- először Cambridge-ben javasolták 1945-ben
- érzékenységi küszöb - legalább 300 fix antitestmolekula egy vörösvérsejtben
- a hemolízist kiváltó antitestek száma - személyenként egyénileg (16-30-300)
- mások dinamikája laboratóriumi paraméterek a hemolitikus anémia (hemoglobin, bilirubin, retikulociták) visszatérhet a normális szintre, és a Coombs-teszt ugyanazon a szinten marad
Az antiglobulin teszt hátrányai
- az antigén antitesthez való kötődésének erőssége nem határozható meg
- ismeretlen számú kötött antitest
- nem határozza meg az antitest típusát
- a pozitív Coombs-teszt nem segít meghatározni az okát
- 0,5% egészséges emberek pozitív Coombs-tesztje legyen hemolitikus vérszegénység jelei nélkül
- nem alkalmas a kezelés sikerének nyomon követésére, mivel nem jelzi az eritrocita hemolízis aktivitását
A vörösvértestek felszínén található nagyszámú antigének. Ezeknek az antigéneknek a típusától függően a legtöbbet vizsgált vércsoportok az ABO, Rh, Kell, Duffy és még sokan mások.
Átlagár az Ön régiójában: 2645 2645-től 2645-ig
1 laboratórium készít ezt az elemzést az Ön régiójában
A tanulmány leírása
Felkészülés a tanulmányra: A vénából vért vesznek, majd természetes alvadással vagy fibrinogén kicsapással szérumot (fibrinogén nélküli vérplazmát) nyernek. Vizsgálati anyag: Vérvétel
A vörösvértestek felületén nagyszámú antigén található. Ezen antigének típusától függően a legtöbbet vizsgált csoportok az ABO, Rh, Kell, Duffy és sok más rendszer. Normális esetben a vérben vannak más antigéncsoportok elleni antitestek, de vérátömlesztés, terhesség, autoimmun betegségek stb. során kimutathatóak a saját antigénjeik elleni antitestek
Módszer
Közvetett reakció A Coombs azon vörösvérsejtek agglutinációjának (csomósodásának) kimutatásán alapul, amelyek felületén hiányos antitestek találhatók, ami antiglobulin szérum hozzáadásakor jelenik meg.
Az első szakaszban a donor vörösvértesteket (O(I) csoport, Rh+) és a tesztszérumot egy kémcsőbe adják. Ha a vizsgált szérumban hiányos vörösvérsejtek elleni antitestek vannak jelen, akkor azok a donor vörösvértestek felületén rögzülnek.
A második szakaszban a donor vörösvértesteket antitestekkel (ha van ilyen) és a standard antiglobulin szérumot humán immunglobulinok elleni antitestekkel az üvegre visszük. Ha az első szakaszban a vörösvértestek elleni antitestek rögzítve vannak a vörösvértestek felületén, akkor standard szérum hozzáadásakor a vörösvértestek az antitestek kölcsönhatása miatt összetapadnak.
Referenciaértékek - norma
(Indirekt Coombs-teszt (antiglobulin teszt, hiányos vörösvértest-ellenes antitestek kimutatása), vér)
Az indikátorok referenciaértékeire vonatkozó információk, valamint az elemzésben szereplő indikátorok összetétele laboratóriumonként kissé eltérhet!
Norma:
Normális esetben a Coombs-teszt elvégzésekor nem szabad ellenanyagnak lennie a saját vörösvértestek ellen, nem fordul elő vörösvérsejt-aggregáció.
Javallatok
Humorális specifikus immunitás vizsgálata autoimmun reakciók gyanúja esetén a szervezetben, Rh-konfliktus anya és magzat között, vérkompatibilitás meghatározása donor és recipiens között
Növekvő értékek (pozitív eredmény)
A vörösvértestek elleni antitesteket a következő esetekben észlelik:
1. Autoimmun hemolitikus vérszegénység
2. Az újszülött hemolitikus betegsége
3. Szisztémás betegségek kötőszöveti
4. Krónikus aktív hepatitis stb.
Antiglobulin elv. A vörösvértestek felszínén elhelyezkedő, inkomplett típusú és komplement molekulák (C) vörösvértest ellenes antitestek kimutatása - közvetlen teszt - humán antiglobulin (antiglobulin szérum) antitesteket tartalmazó állati szérummal érintkezve történik. A szérumban mentes részleges antitestek kimutatása – közvetett teszt – úgy történik, hogy rögzítjük őket a keveréken normál vörösvértestek 0. csoport, amelynek minden antigénje az ismert Rh rendszerbe tartozik, majd antiglobulin szérum hatására agglutinálódik.
Anyagok, reagensek a Coombs antiglobulin teszthez: kémcsövek 10/100 ml; beosztásos pipetta 1, 2 ml; Pasteur pipetták; állványok; csiszolatlan üveg csúszdák; 8,5‰ NaCl oldat; vörös vérsejtek. A páciens vörösvérsejtjeit, valamint a 0. csoportba tartozó vörösvértesteket a frissen vett vérből véralvadásgátló szerrel (EDTA-oldat) nyerik ki.
A 0. csoportba tartozó vörösvértesteket úgy kell kiválasztani, hogy azok normális egyénektől származzanak, és az összeset tartalmazzák Rh rendszer antigének. Legfeljebb 7 napig tárolhatók autológ plazmában + 4°C-on. 0. csoportú vörösvértestek hiányában ismert antigén mozaik, 0. csoportú vörösvértestek, Rh-pozitív és Rh-negatív vörösvértestek keveréke használható.
Szérum a beteget frissen kell kiválasztani.
Antiglobulin szérum az intézet készítette. Dr. I. Cantacuzino, liofilizált formában, 1 ml-es ampullákban kapható. Feloldódás után a szérumot -20°C-on tárolja.
Coombs antiglobulin teszt technika:
A) Közvetlen Coombs-teszt: Öblítse le a páciens vörösvérsejtjeit háromszor 8,5‰-os NaCl oldattal.
Vigyen fel egy nagy csepp hígítású antiglobulin szérumot több tárgylemezre, és mellé egy kis cseppet a páciens vörösvértest-üledékéből; keverje össze a cseppeket az üveg sarkával. Hagyja az elkészített anyagot az asztalon 5 percig, majd vizsgálja meg az agglutinátok jelenlétét. Ha az eredmény pozitív, határozza meg a maximális agglutinációs titert.
b) Közvetett Coombs-teszt: 0. csoport vörösvértestei, Rh-pozitív és Rh-negatív, öblítsük le háromszor 8,5‰-os NaCl-oldattal, és tegyük ki a páciens szérumának 2 csepp eritrocitát 8-10 csepp szérumonként, majd inkubáljuk 60 percig 37°-os hőmérsékleten. Ezt követően mossa meg ismét háromszor a vörösvértesteket, és kezelje őket antiglobulin szérummal az utasításoknak megfelelően közvetlen teszt Coombs.
Amikor arról beszélünk a hideg aktív antitestekről 60 percig érzékenyítse a 0. csoport vörösvértesteit. + 4°C hőmérsékleten.
jegyzet 1) Ne végezzen közvetlen Coombs-tesztet egy vagy több napig + 4°C-on vagy szobahőmérsékleten tárolt vörösvértesteken, mivel az eredmények hamis pozitívak lehetnek a normál szérumban jelenlévő hiányos hidegaktív antitestek rögzítése miatt. 2) Súlyos hiperproteinémia esetén 4-5 alkalommal mossa le a vörösvértesteket, és szulfosalicilsavval ellenőrizze, hogy az utolsó mosófolyadékban nincs-e szérumfehérje.
2 μg IgG/ml esetleges maradvány az eritrocita üledékben semlegesíti az antiglobulin szérumot. A Coombs-teszt monospecifikus anti-IgG, -IgM, -IgA -C3 és -C4 szérummal is elvégezhető, hogy tisztázza a vörösvértestek felszínén található sejtek típusát, például autoimmun hemolitikus betegségben szenvedő betegeknél. anémia.
- egy vizsgálat, amely segít meghatározni a vér hiányos vörösvértest-ellenes antitesteinek tartalmát. Ez az antiglobulin teszt lehetővé teszi a terhes nők antitesteinek kimutatását.
Ezenkívül lehetővé teszi kezdeti szakaszaiban diagnosztizálni hemolitikus anémia Rh-konfliktusban szenvedő újszülötteknél. Ez segít megelőzni a normál vérképzéshez szükséges vörösvérsejtek pusztulását. Ezt a tesztet 1945-ben készítette Robert Coombs, ezért kapta a nevét.
A Coombs-teszt egy sokoldalú teszt, amely lehetővé teszi a vérképzőszervi rendellenességek időben történő diagnosztizálását felnőtteknél és gyermekeknél egyaránt.
Létezik a következő típusok ilyen tesztek:
- Közvetlen Coombs-teszt– lehetővé teszi a vörösvértestek felszínén található antitestek meghatározását. Általában egy ilyen vizsgálatot hemolízis gyanúja, autoimmun hemolitikus anémia vagy más autoimmun betegségek esetén írnak elő. Ezenkívül azt követően hajtják végre drog terápia kinin, penicillin vagy metildopa alapú gyógyszerek, vagy vérátömlesztés után. A pontosabb eredmények elérése érdekében a vizsgálat előtt legalább 1 hétig teljesen abba kell hagynia a gyógyszerek szedését.
- Közvetett Coombs-teszt– egy teszt, amellyel a plazmában kimutatható vörösvértest-ellenes antitestek. Általában terhesség alatt és vérátömlesztés előtt végzik. Vörösvértest ellenes antitestek jelennek meg az emberi vérben az immunrendszer reaktív működése során, vagy reakcióként bizonyos gyógyszerek. A pontosabb vizsgálat érdekében egyszerre több mintavételt kell végezni 2 órás időközönként.
Használati javallatok
A Coombs-tesztet csak komoly jelzések esetén kell elvégezni. Ez egy költséges és időigényes tanulmány, amely egy speciális teszt.
Jellemzően a következő helyzeteket tekintik annak végrehajtására utaló jelnek:
- Vérátömlesztés során. A teszt lehetővé teszi annak meghatározását, hogy a recipiens vére gyökeret ereszt-e az emberi szervezetben, valamint hogy lehetséges-e az adományozás. Ebben az esetben mind a donor, mind a recipiens anyagát meg kell vizsgálni. Fontos meghatározni az antitestek természetét, mert ha az Rh-konfliktus hátterében a szervezetben inkompatibilisek, a az immunrendszert. Ez a fejlődéshez vezet súlyos betegségek, és ritka esetekben akár halált is.
- Előtt sebészeti beavatkozások amikor fennáll a vérveszteség veszélye. Ez azért történik, hogy az orvos azonnal be tudja vezetni megfelelő vér hogy helyreállítsa a testet.
- Az Rh szenzibilizáció kimutatására. Rhesus – specifikus antigén, amely minden nő szervezetében előfordul a terhesség alatt. Ha az anya Rh pozitív, az apa pedig negatív, vagy fordítva, akkor a gyermeknek nincs függősége – bárkit örökölhet. Ha a gyermek az anyától az ellenkező rhesust kapja, nagy a szenzibilizáció veszélye. Ezt a jelenséget az anya és a gyermek vérének keveredése jellemzi. Ez mind a terhesség, mind a szülés során előfordulhat.
Ha egy terhes nő testében Rhesus-konfliktus lép fel, akkor az anya immunrendszere úgy kezdi felfogni magzatát, mint idegen test. Emiatt nagy a kockázata annak, hogy támadni kezd.
Az ilyen tevékenységek eredményeként a baba fejlődhet súlyos patológiák. Leggyakrabban eritroblasztózis fordul elő - olyan jelenség, amelyben a gyermek teste nem tud elegendő számú vörösvérsejtet előállítani.
Ezenkívül az Rh-konfliktus miatt a magzati halál az anyaméhben vagy közvetlenül a születés után következhet be. A kezelés megfelelő megközelítésével az ilyen súlyos következmények könnyen elkerülhetők.
Eltérés a normától
Ha a Coombs-teszt pozitív, az orvos arra a következtetésre jut, hogy a vérszérumban vörösvértestek elleni antitestek találhatók. Ez azt jelenti, hogy előfordulhat, hogy a donor vére nem kompatibilis a páciens vérével.
Ha pozitív eredményt diagnosztizálnak egy terhes nő testében, akinek Rh-negatív vére van, akkor teste antitesteket tartalmaz a magzat vérével szemben.
Ez Rh-konfliktusra utal, amely megköveteli az orvos rendkívül körültekintő megközelítését a terhesség kezelésében, valamint a nő összes utasításának és ajánlásának betartását.
Ha antitestek vannak jelen a gyermek vérében, az újszülött hemolitikus betegségét diagnosztizálják. Ebben az esetben megismételt vizsgálatot végeznek annak meghatározására, hogy a várandós anya vérében az antitestszint emelkedése bekövetkezik-e vagy sem.
A Coombs-teszt lehetséges szövődményei
Coombs-teszt – eléggé biztonságos kutatás, amely számos betegség diagnosztizálását teszi lehetővé autoimmun betegség. Ritkán okoz komplikációkat, általában negatív következményei vérvételhez kapcsolódik.
Ők:
- Bőr alatti vérzés vagy vérzés
- Szédülés és ájulás
- Fertőző fertőzés
7 295
