С целью установления точного диагноза, больного обследуют комплексно. Общий анализ крови малоинформативен, его не используют при диагностировании венерической инфекции.

Виды исследований и биоматериалов для анализа

Для выявления болезни используют различные методики и биоматериалы. На ранних этапах сифилис определяют с помощью бактериоскопического теста. Образцы исследуют под микроскопом. Прибор позволяет обнаружить штаммы возбудителя. Позднее проводят серологические анализы. Благодаря им, в пробах выявляют антигены и антитела к болезни.

Способы определения половой инфекции поделены на 2 категории:

• Прямые, выявляющие патогенный микроорганизм. К ним относят: темнопольная микроскопия, RIT-анализ (инфицирование кроликов биоматериалом для исследования), метод ПЦР – полимеразной цепной реакции (с его помощью находят генетические элементы возбудителя).
• Непрямые (серологические) позволяют обнаружить антитела к патогену. Они продуцируются иммунной системой, как ответная реакция на заражение.

Серологические методики поделены на 2 категории: трепонемные и нетрепонемные.

Нетрепонемные, включающие: тест с толуидиновым красным, анализ РСК, RPR- тест, исследование крови экспресс-методом РМП.

Трепонемные, объединяющие: иммуноблоттинг, РСК-тест, РИТ-анализ, исследование РИФ, РПГА-тест, ИФА-анализ.

Информативность тестов на инфекцию различна. Чаще делают основные виды анализов на сифилис, к которым отнесены серологические методики. Пациентам, нуждающимся в обследовании, врач назначает тесты индивидуально.

Биоматериал для исследования

Чтобы выявить бледную трепонему – патогена, который выглядит, как спираль и вызывает сифилис, берут пробы:

• венозной крови;
• ликвора (секрета из спинномозгового канала);
• содержимое лимфатических узлов;
• ткани изъязвлений.

Если необходимо провести тесты на обнаружение сифилиса, кровь сдают не только из локтевой вены, но и из пальца. На выбор биоматериала и способ исследования влияет тяжесть течения инфекции и оснащенность диагностического центра.

Прямые исследования

Убедительным доказательством сифилиса является выявление возбудителей инфекции под микроскопом. Таким способом находят патоген у 8 обследуемых из 10. Отрицательный результат у 2 оставшихся пациентов не говорит о том, что они не инфицированы.

Исследование делают на первичном и вторичном этапе (стадии) заболевания, для которых характерно появление высыпаний на коже и сифилом (изъязвлений) на эпителиальных тканях или слизистых оболочках. В отделяемом из очагов поражения находят патогены, вызывающие венерическое заболевание.

Точнее с определением трепонем справляется сложный тест, обозначающийся как РИФ – реакция иммунофлуоресценции. Образец для исследования предварительно обрабатывают флуоресцентными антителами. Соединения, способные светиться, склеиваются с бактериями. Рассматривая под микроскопом образцы, в случае заражения лаборант видит сверкающих возбудителей.

Тест используют для раннего диагностирования болезни. Чем дольше длится заболевание, тем ниже чувствительность исследовательских способов. Кроме того, она падает после обрабатывания высыпаний и язв антисептическими средствами и у пациентов, прошедших лечение. Изредка исследование дает ложноотрицательные и ложноположительные результаты.

RIT-анализ – высокоточный способ обнаружения сифилиса. При проведении теста результаты приходится ждать долго. До тех пор, пока у инфицированного кролика не проявятся признаки инфекции. Тест применяют очень редко, несмотря на то, что он сверхточен.

С помощью полимеразной цепной реакции на сифилис определяют генетические элементы патогенов. Единственный недостаток ПЦР – дороговизна.

Нетрепонемные тесты

Такие анализы крови помогают выявить антитела, появляющиеся в ответ на кардиолипин – соединение, относящееся к общему строению мембран патогенов.

Реакция Вассермана (РВ или RW)

Самым известным исследованием на сифилис считается реакция Вассермана. РВ входит в категорию реакций связывания комплемента (РСК). Новые методы РСК обладают существенными отличиями от традиционной RW. Но обозначаются они, как и раньше понятием «реакция Вассермана».

Иммунная система, синтезирует антитела (маркеры) в ответ на вторжение трепонем. Их выявляют при анализе крови на сифилис методом реакции Вассермана. Положительный результат RW подтверждает инфицирование обследуемого.

Реакция гемолиза – индекс РВ анализа. При ней взаимодействуют 2 субстанции: гемолитическая сыворотка и эритроциты барана. Сыворотку делают, иммунизируя кролика эритроцитами барана. Активность биологической жидкости снижают путем прогревания.

Показатели РВ зависят от того, прошел гемолиз или нет. В пробе чистой от маркеров происходит гемолиз. При этом реакция на антигены невозможна. Комплемент тратится на взаимодействие с бараньими эритроцитами. Когда в образце есть маркеры, комплимент вступает в реакцию с антигенами. В этом случает гемолиз не протекает.

Компоненты для RW отмеряют в равном количестве. Образец, содержащий сыворотку, антиген и комплимент, прогревают. Добавляют в пробу бараньи эритроциты и сыворотку. Держат при температуре 37 градусов, пока не наступит гемолиз в контрольном образце, который вместо антигена содержит физраствор.

Для проведения РВ используют готовые антигены. На упаковках указывают титры и технологию их разбавления. Позитивный результат RW обозначается крестиками. Готовые результаты тестов обозначаются следующим образом:

• ++++ – максимально позитивные (гемолиз задержался);
• +++ – положительные (гемолиз существенно запаздывает);
• ++ – слабо позитивные (гемолиз частично промедлил);
• + – сомнительные (гемолиз припозднился незначительно).

При отрицательной РВ гемолиз полностью осуществился во всех образцах. Но в некоторых случаях получают ложноположительные данные. Такое происходит, когда кардиолипин входит в состав клеток. Защитные механизмы не продуцируют маркеры к «родному» кардиолипину.

Однако изредка возникают исключительные ситуации. Положительную RW выявляют у незараженных людей. Такое возможно, если пациент перенес тяжелую болезнь, вызванную вирусами (пневмонию, малярию, туберкулез, патологии печени и крови). Положительной РВ бывает у беременных. Обусловлено это тем, что иммунитет чрезмерно ослаблен.

Если возникает подозрение, что результат анализа на сифилис ложноположительный, пациента обследуют дополнительно. Проблема в том, что эту инфекцию невозможно выявить по единственному клинико-лабораторному тесту. Часть исследований дает ложные показатели, которые бывают, как отрицательными, так и положительными.

Получить достоверные данные помогает развернутый анализ на сифилис. Благодаря ему устанавливают истинный диагноз: доказывают заражение или исключают его. Кроме этого, расширенный тест позволяет остановить развитие инфекции, исключить проведение ненужной терапии.

РСК и РМП

Проводя обследование на сифилис, традиционную реакцию Вассермана применяют крайне редко. Вместо нее используют метод РСК. Анализ дает положительный результат спустя 2 месяца после инфицирования. При вторичной форме заболевания он положителен почти в 100% случаев.

Способ микропреципитации (РМП) – исследование с механизмом аналогичным реакции Вассермана. Методика проста в исполнении. Она быстро проводится. Для исследования кровь на сифилис в этом случае сдают из пальца. Методика дает положительный результат через 30 дней с момента появления сифилом. Ошибки при исследовании не исключены. Ложноположительные данные получают на фоне: обострившихся инфекций, пневмонии, инфаркта, инсульта, интоксикации.

К ошибочным тестам приводит:

Обнаружив сомнительный анализ на сифилис, делают трепонемные исследования. Они помогают уточнить диагноз.

RPR и тест с толуидиновым красным

Метод плазменных реагинов (RPR) – очередной аналог реакции Вассермана. Его применяют, когда необходимо:

• провести скрининг бессимптомных лиц;
• подтвердить сифилис;
• исследовать донорскую кровь.

Тест с толуидиновым красным, как и RPR, проводят, чтобы оценить динамику лекарственной терапии. Их показатели падают при отступлении болезни, и увеличиваются, когда патология рецидивирует.

Нетрепонемные анализы показывают насколько больной излечился. Получение отрицательных результатов на сифилис говорит о том, что болезнь отступила полностью. Первое обследование делают спустя 3 месяца после курсовой терапии.

Трепонемные исследования

Высоко результативные анализы проводят, используя трепонемные антигены. Их делают, когда:

• получен положительный результат при методе РМП;
• необходимо распознать ошибочные данные, возникающие при скрининговых тестах;
• подозревают развитие сифилиса;
• нужно диагностировать скрытно текущую инфекцию;
• надо провести ретроспективную диагностику.

Тесты РИФ и РИТ

У множества пролеченных больных трепонемные исследования проб дают положительные результаты долгое время. По ним нельзя судить о степени эффективности лечения. РИТ и РИФ – сверхчувствительные тесты. Благодаря им получают достоверные данные. Эти анализы трудоемки, они требуют приличных временных затрат, наличия прогрессивного оборудования. Их способны проводить квалифицированные медработники.

Выполняя РИФ анализ на сифилис, положительные данные получают спустя 2 месяца после инфицирования. Отрицательные параметры подтверждают, что обследуемый здоров. Положительные – позволяют предположить, что человек инфицирован.

РИТ проводят, когда реакция микропреципитации положительна. Такой анализ крови на сифилис помогает опровергнуть или удостоверить наличие инфекции. Тест сверхчувствителен, он точно указывает заражен пациент или здоров. Но исследование дает достоверные данные только через 3 месяца после проникновения трепонем в организм.

Метод иммуноблоттинга

К сверхточным тестам относят иммуноблоттинг. Такой анализ крови при сифилисе делают редко. Его применяют при обследовании новорожденных детей. Он не пригоден для экспресс-тестирования. Положительные результаты получают с опозданием. Их гораздо раньше дает метод микропреципитации.

ИФА и РПГА

К информативным сверхточным методам исследования относят тесты ИФА и РПГА. С их помощью проводят экспресс-диагностирование. Лаборанты делают огромное количество таких анализов. Благодаря им удается установить точный диагноз.

РПГА анализ на сифилис положителен через 30 дней после проникновения возбудителя в организм. С его помощью диагностируют первичную инфекцию, когда появляются язвы и сыпь.

Благодаря ему удается выявить запущенные, скрытно текущие, а также врожденные формы патологии. Но проводят его совместно с нетрепонемными и трепонемными тестами. Комплексное диагностирование гарантирует достоверность результатов. Тройное тестирование точно доказывает наличие или отсутствие венерической инфекции.

Положительная реакция сохраняется на протяжении большого отрезка времени. По этой причине исследование не используют для оценки эффективности лечения.

ИФА анализ положителен спустя 21 день с момента заражения. Тест иногда дает ошибочные результаты. Они появляются при системных патологиях, нарушенных обменных процессах. Их результативность сомнительна у ребенка, родившегося от инфицированной матери.

Погрешности, получаемые при серологических способах исследования, стали причиной открытия прогрессивных методик диагностики. Газовая хроматография и масс-спектрометрия не дают ложных результатов. Единственное препятствие для их массового использования – дороговизна.

Алгоритм диагностирования

• При нахождении сифилиса в первичной фазе (до 60 дней с момента инфицирования), возбудителя отыскивают на темном фоне или используют для их обнаружения флюоресцирующие антитела.
• Если патология находится в первичной, вторичной или скрытой форме применяют РМП и ИФА. Подтвердить результаты помогает РПГА анализ крови на сифилис.
• При рецидивах вторичной инфекции анализируют отделяемое изъязвлений и высыпаний. Из образцов извлекают возбудителей, изучают их с помощью микроскопии.
• Когда заболевание входит в третичную фазу, у 1/3 пациентов РМП отрицательная. При этом результаты ИФА и РПГА положительны. Однако они не всегда указывают на третичный период, а подтверждают, что человек раньше перенес инфекцию. Слабоположительный тест – доказательство полного излечения, а не развития третичной фазы.
• Подтверждая врожденный сифилис, анализ крови берут у матери и младенца. Сравнивают данные тестов РМП. Учитывают то, что у малыша ИФА и РПГА положительны. Подтверждают диагноз, используя методику иммуноблоттинга.

Сифилис, как любая системная патология, поражает весь организм. Поэтому обследование на него проходят при беременности, перед абортом. Пациенткам делают РМП, ИФА, РПГА.

Как сдать анализ

Отправляет пациентов на анализ врач-венеролог. Частные лаборатории делают анонимные исследования на сифилис по желанию клиента. Для сдачи теста в них не нужно направление врача.

Правила проведения исследования:

• Кровь в лаборатории берут утром на пустой желудок (едят после процедуры). До анализа разрешено пить только воду.
• За 2 суток до обследования запрещено: питаться жирной едой и употреблять спиртное.
• Кровь берут из пальца или вены.
• Сколько длится исследование? Обычно не больше суток. Расшифровку анализов на сифилис получают у лаборантов либо лечащего врача.
• Сколько действителен тест? По прошествии 3 месяцев результаты анализов теряют силу. Их сдают снова.

Если расшифровка анализа показывает, что тест положителен, необходимо посетить венеролога, который назначит дополнительное обследование для точного подтверждения диагноза и подберет схему необходимого лечения.

Тестирование спинномозгового содержимого

Диагноз нейросифилис ставят после того, как исследуют ликвор. Такой анализ делают:

• людям со скрытой формой инфекции;
• при симптомах заболеваний нервной системы;
• бессимптомном, запущенном нейросифилисе;
• выздоровевшим больным с положительными серологическими реакциями.

Направление на исследование ликвора дает врач. Из спинномозгового канала берут пункцию в 2 пробирки. Прокол смазывают йодом, закрывают стерильной салфеткой. После процедуры пациент соблюдает постельный режим на протяжении 2 дней.

В 1 образце определяют количество белка, клеток, следы менингита. Во второй пробе вычисляют антитела к возбудителю сифилиса. Для этого делают тесты: РВ, РМП, РИФ и РИБТ.

В зависимости от того сколько выявлено нарушений, различают 4 разновидности ликвора. Каждая указывает на определенные повреждения нервной системы. Врач диагностирует:

Помимо того, по результатам тестов судят о выздоровлении пациента.

Интерпретация тестов – задача врача. Только он способен сделать правильные выводы, при необходимости назначить дополнительное обследование, поставить точный диагноз. Не стоит делать самостоятельную диагностику при опасной системной патологии. Ошибка в диагнозе влечет за собой серьезные последствия.

Реакция связывания комплемента (РСК)

Реакция связывания комплемента (РСК) ставится в две фазы: в первой фазе антиген соединяют с исследуемой сывороткой, в которой предполагают наличие антител и добавляют комплемент, инкубируют в термостате 30 минут.

Вторая фаза: добавляют гемолитическую систему (эритроциты барана +гемолитическая сыворотка). После инкубации в термостате в течение 30 минут учитывают результат.

При положительной РСК антитела сыворотки, соединившись с антигеном, образуют иммунный комплекс, который присоединяет к себе комплемент, и гемолиза не произойдет. Если реакция отрицательная (антител в исследуемой сыворотки нет) - комплемент останется свободным и произойдет гемолиз.

РСК применяется для серологической диагностики сифилиса, гонорее, сыпного тифа и других заболеваний.

Реакции иммунитета с использованием меченых антигенов и антител основаны на том, что один из ингредиентов, участвующих в реакции (антигены или антитела) соединяют с какой-либо меткой, которую легко можно обнаружить. В качестве метки используют флюорохромы (РИФ), ферменты (ИФА), радиоизотопы (РИА), электроноплотные соединения (ИЭМ).

Иммуноферментный анализ (ИФА), как и другие реакции иммунитета, используется: 1) для определения неизвестного антигена с помощью известных антител или 2) для выявления антител в сыворотке крови с помощью известного антигена. Особенность реакции в том, что известный ингредиент реакции соединён с ферментом (например, пероксидазой). Присутствие фермента определяют с помощью субстрата, который при действии фермента окрашивается. Наиболее широко применяется твёрдофазный ИФА.

1) Обнаружение антигена. Первый этап - адсорбция специфических антител на твёрдой фазе, в качестве которой используют полистироловые или поливинилхлоридные поверхности лунок пластиковых панелей. Второй этап - добавление исследуемого материала, в котором предполагается наличие антигена. Антиген связывается с антителами. После этого лунки промывают. Третий этап - добавление специфической сыворотки, содержащей антитела против данного антигена, меченые ферментом. Меченые антитела присоединяются к антигенам, а их избыток удаляется промыванием. Таким образом, если в исследуемом материале имеются антигены, на поверхности твёрдой фазы образуется комплекс антитела - антиген - антитела, меченые ферментом. Для обнаружения фермента добавляют субстрат. Для пероксидазы субстратом служит ортофенилендиамин в смеси с Н 2 О 2 в буферном растворе. Под действием фермента образуются продукты, имеющие коричневую окраску.

2) Обнаружение антител. Первый этап - адсорбция специфических антигенов на стенках лунок. Обычно в коммерческих тест-системах антигены уже адсорбированы на поверхности лунок. Второй этап - добавление исследуемой сыворотки. При наличии антител образуется комплекс антиген-антитело. Третий этап - после отмывания в лунки добавляют антиглобулиновые антитела (антитела против человеческих глобулинов), меченые ферментом. Результаты реакции оценивают, как указано выше.

В качестве контролей используют образцы заведомо положительные и заведомо отрицательные, которые имеются в коммерческих системах.

ИФА применяется для диагностики многих инфекционных заболеваниях, в частности, ВИЧ-инфекции, вирусных гепатитов.

Иммуноблоттинг - это разновидность ИФА (сочетание электрофореза и ИФА). Методом электрофореза в геле разделяют биополимеры, например, антигены вируса иммунодефицита человека. Затем переносят разделённые молекулы на поверхность нитроцеллюлозы в том же порядке, в каком они находились в геле. Процесс переноса называется блоттинг, а полученный отпечаток - блот (англ. blot - пятно). На этот отпечаток действуют исследуемой сывороткой. Затем добавляют сыворотку против глобулинов человека, меченую пероксидазой, затем субстрат, который под действием фермента приобретает коричневый цвет. Образуются коричневые полосы в тех местах, где антитела соединились с антигенами. Метод позволяет обнаружить антитела к отдельным антигенам вируса.

Радиоиммунный анализ (РИА). Метод позволяет определить количество антигена в исследуемой пробе. Сначала к иммунной сыворотке присоединяют материал, предположительно содержащий антиген, затем - известный антиген, меченный радиоизотопом, например I 125 . В результате происходит связывание определяемого (немеченого) и известного меченого антигена с ограниченным количеством антител. Так как меченый антиген добавляется в определённой дозе, то можно определить, какая его часть связалась с антителами, а какая осталась свободной из-за конкуренции с немеченым антигеном и была удалена. Количество меченого антигена, связавшегося с антителами, определяют с помощью счётчика. Оно обратно пропорционально количеству определяемого антигена.

Иммуноэлектронная микроскопия (ИЭМ). К антигену, например, к вирусу гриппа, присоединяется специфическая антисыворотка, меченая электроноплотным веществом. В качестве метки применяют металлосодержащие белки (ферритин, гемоцианин) или коллоидное золото. При микроскопии в электронном микроскопе делают фотографии, на которых видны вирионы гриппа с присоединившимися к ним тёмными точками - молекулами меченых антител.

Приобретённый иммунитет, отличие его от наследственного (видового, врождённого). Виды приобретённого иммунитета.

Задача. В семье заболел дифтерией ребенок Валерий, трёх лет. Другие члены семьи не заболели, причём мать переболела дифтерией в детстве, а отец был привит дифтерийным анатоксином. Старшая сестра Наташа, пяти лет, в своё время не была привита дифтерийным анатоксином из-за медицинских противопоказаний, поэтому пришлось провести ей экстренную профилактику с помощью противодифтерийной антитоксической сыворотки. Младший брат, Виталий, трёх месяцев, не заболел, хотя ничем не был привит. В доме есть кошка и собака, они не заболели. Назовите для каждого из членов семьи и для животных вид иммунитета, благодаря которому они не заболели.

Что такое антиген? Какие вещества могут быть антигенами? Полноценные антигены и гаптены, чем они отличаются друг от друга? Структура антигена. Как называется часть молекулы антигена, определяющая его специфичность? Назовите известные Вам антигены. Что такое аутоантигены? Антигенное строение микробной клетки. Жгутиковые и соматические антигены; локализация, буквенное обозначение, химическая природа, отношение к температуре, способ получения, практическое применение. Анатоксин, его свойства, применение, получение. Какая ткань составляет иммунную систему организма? Укажите центральные и периферические органы иммунной системы человека. Опишите процесс формирования гуморального и клеточного иммунного ответа. Укажите клетки, которые осуществляют захват и переваривание антигена; клетки, которые взаимодействуют при формировании гуморального иммунитета, клеточного иммунитета; клетки, которые трансформируются и превращаются в плазмоциты, продуцирующие антитела; клетки, стимулирующие этот процесс; клетки, которые угнетают иммунный ответ; клетки, которые убивают опухолевые клетки, и заражённые вирусом клетки. Что такое антитела? Как получить иммунную сыворотку? Как получить сыворотку, которая бы нейтрализовала столбнячный токсин? Против каких антигенов образуются антитоксины, агглютинины, гемолизины? Какие антитела образуются при введении в организм дифтерийного анатоксина? дифтерийных бактерий? Химическая природа и структура антител. Что такое активный центр иммуноглобулина? Перечислите классы иммуноглобулинов, их свойства. Укажите класс иммуноглобулинов, способных проникать через плаценту. К какому классу относятся секреторные иммуноглобулины? Динамика накопления антител. Чем отличается вторичный иммунный ответ от первичного? Как в практической медицине используются знания о динамике иммунного ответа? Что такое реакции иммунитета, каков их механизм, фазы реакции. В каких 2-х направлениях используют реакции иммунитета? Перечислите реакции иммунитета.

Задача. Поставьте вместо пропущенных слов «анатоксин» или «антитоксин»: _________ является антигеном, _________ является антителом, __________ создаёт при введении в организм активный иммунитет, __________ создаёт при введении в организм пассивный иммунитет, __________ получают путём иммунизации животных, ___________ получают из токсина при воздействии формалином и теплом, ___________ нейтрализует токсины, __________ вызывает в организме образование антител.

Реакция агглютинации: что такое агглютинация, что является антигеном, что - антителом; методы постановки, какие контроли ставятся и для чего; как должны выглядеть контроли. Агглютинирующие сыворотки, что они содержат, как их получают, для чего применяются; что такое титр агглютинирующей сыворотки? Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации: что служит антигеном в этой реакции, как его получают, механизм реакции. Что такое эритроцитарный диагностикум? Что такое антительный эритроцитарный диагностикум? Реакции преципитации: что такое преципитация, что служит антигеном; как получить преципитирующую сыворотку? Что такое титр преципитирующей сыворотки? Методы постановки, практическое применение.

Реакция связывания комплемента (РСК): принцип РСК; что образуется при взаимодействии иммунной сыворотки со специфическим антигеном; что происходит с комплементом, если он присутствует при этом взаимодействии? Какова судьба комплемента в том случае, если между антигеном и антителами нет специфического сродства? Если конечным результатом РСК является гемолиз, что это означает - положительный или отрицательный результат? Методика постановки РСК. Почему исследуемую сыворотку надо инактивировать? Гемолитическая сыворотка: что содержит, как ее получают, что такое титр и как его определяют? Комплемент: химическая природа, отношение к высокой температуре, где содержится? Как можно разрушить комплемент? Что практически применяется в качестве комплемента?

Задача. На одежде человека, обвиняемого в убийстве, обнаружено пятно крови. С помощью какой реакции можно определить, человеческая ли это кровь; что в этой реакции будет антигеном, и что антителами; какой диагностический препарат нужно иметь в лаборатории для этой реакции, как его приготовляют?

Задача. Как при помощи реакции преципитации определить, является ли доставленный для анализа образец мяса крупного рогатого скота или мясом лошади; какие необходимы диагностические препараты?

Реакция преципитации в агаровом геле, способы постановки, практическое применение.

Что показывает серологический анализ крови?

Что показывает серологический анализ крови? Диагностические мероприятия – это важнейший этап в терапии любого заболевания. Успех лечения зависит не только от назначенных препаратов, но и во многом от того, насколько правильно был поставлен диагноз.

Кроме того, диагностика позволяет предотвратить осложнения и сопутствующие заболевания. С помощью серологического анализа крови пациента выявляют наличие антител и антигенов. Исследование помогает найти множество заболеваний, определить их фазу и контролировать прохождение лечения.

Что такое серология?

Серологией называется отрасль иммунологии, изучающая реакции антигенов на антитела. Данный раздел медицины занимается изучением плазмы крови и ее иммунологических характеристик.

На сегодняшний день серологический анализ крови на антитела – это надежный способ выявления вируса иммунодефицита человека, гепатита, бруцеллеза, ЗППП и других опасных для жизни заболеваний. Разберемся, в каких случаях его назначают.

Показания к назначению

Серологический анализ крови необходим для выявления возбудителя болезни при затруднениях в постановке диагноза.

Для проведения этой реакции в плазму вводят антигены возбудителей, а затем протекающий процесс изучает лаборант. Либо осуществляют обратную реакцию: в инфицированную кровь вводят антитела для определения конкретной принадлежности возбудителя.

Сфера применения

Данное исследование используют в различных отраслях медицины. С помощью этой реакции выявляют специфические клетки и антитела, вырабатываемые организмом для того, чтобы бороться с инфекциями и вирусами.

Кроме этого, с помощью серологического метода определяется группа крови человека.

Подобное серологическое исследование анализа крови используют в гинекологии для диагностики болезней, передаваемых половым путем. Практикуется такой метод и для комплексных обследований беременных женщин (выявление токсоплазмоза, ВИЧ, сифилиса и т. д.). Прохождение этого теста является обязательным при постановке на учет в женской консультации.

У детей серологическая реакция используется для подтверждения диагноза так называемых «детских» заболеваний (ветрянки, кори, краснухи и т. д.) в том случае, если симптоматика не имеет выраженных проявлений и невозможно выявить болезнь, анализируя клинические показания.

Выявление венерических заболеваний

Для венерологов это тестирование поистине незаменимо и позволяет поставить диагноз очень точно.

При смазанной клинической картине серологический анализ крови на сифилис, лямблиоз, уреаплазмоз, хламидиоз, герпес и другие заболевания позволяет быстро выявить наличие антител.

Вирусные и инфекционные заболевания

Серологический анализ активно используется гастроэнтерологами, гепатологами и инфекционистами для диагностики вирусного гепатита.

Расшифровка серологического анализа крови дает возможность определить стадию протекания заболевания и ответить на вопрос, насколько необходима госпитализация в данный момент. Как правильно подготовиться?

Подготовка к сдаче анализа

Серологический анализ крови делают и в государственных, и в коммерческих клиниках. Предпочтение стоит отдать лаборатории, располагающей современным оборудованием и квалифицированным персоналом.

Биологическими образцами для исследования могут быть слюна и кал, но в большинстве случаев используется венозная кровь больного. Кровь для серологического теста берут из локтевой вены в условиях лаборатории. Перед тем как сдавать анализ, следует проконсультироваться с врачом по поводу подготовки к этой процедуре.

Для подготовки к сдаче анализа на серологическое исследование нужно соблюсти несколько несложных правил.

Кровь сдают в спокойном состоянии до приема пищи, то есть натощак. Перед этим не следует проходить другие исследования, например делать рентген, УЗИ и т. д.

Нужно исключить прием антибактериальных и некоторых других препаратов за несколько недель до сдачи крови. Определенные рекомендации в этом случае зависят от того заболевания, на которое делается тест. К примеру, исследование на гепатит предполагает исключение жирной пищи и алкоголя за 48 часов до процедуры.

Реакция флюоресценции

Среди разновидностей серологических реакций существует реакция флюоресценции. По этой методике используется реагент, подсвечивающий антитела в сыворотке крови.

Постановка серологической реакции прямого типа предполагает маркировку специфических антител флюоресцирующим веществом. Такая реакция является самой быстрой и проводится одноэтапно.

Другой вариант проведения такого анализа имеет название непрямого, или РНИФ. Проводится он в два этапа. На первом этапе антитела не маркируются флюоресцирующими метками, а на втором применяются соответственно отмеченные антитела для определения антигенов и антител. Свечение возникает только после того, как происходит связывание со специфическим антителом.

Что же показывает серологический анализ крови? Итог всей процедуры оценивает специальный прибор, который анализирует силу излучения, выявляет форму и размер исследуемого объекта. Возбудители инфекционных заболеваний выявляются с результатом, достоверность которого составляет%, в зависимости от вида и стадии патологии.

Иммуноферментный анализ

В этих видах серологического исследования применяются уникальные стабильные реагенты. Отмеченные вещества как бы приклеиваются к искомым антителам. В итоге мы получаем качественный или количественный результат.

Если выраженных маркеров не обнаружилось, то результат будет считаться отрицательным. Если присутствие антител в биологических образцах при качественном исследовании обнаружено, то результат анализа считается положительным. При количественном определении клеток анализ дает более точный результат.

Анализируя показатели анализа (например, сумму выявленных клеток) специалист определяет, находится ли заболевание на начальном этапе, в острой стадии, или это обострилась хроническая форма патологии. Для того чтобы поставить диагноз, врач учитывает не только данные серологического исследования, но и клиническую картину заболевания.

Особенности данного теста

Проведение данного анализа не всегда способно дать 100%-ную уверенность в том, что определенное заболевание обнаружено. Бывает так, что результаты могут быть неоднозначными и требуется проведение других процедур.

Например, во время исследования на бруцеллез сыворотка крови проходит контроль на самозадержку без антигена. Это существенно повышает достоверность тестирования. Анализ на бруцеллез может иметь положительное или отрицательное значение, а также вызывать сомнения.

При получении сомнительных результатов, не имеющих однозначной трактовки, рекомендовано сдать анализ повторно. Кроме того, бруцеллез можно выявить в результате посевов крови, исследовав костный мозг и спинно-мозговую жидкость.

Плюсы серологического анализа крови

Диагностические методики с использованием серологических реакций обширно используются в современной медицинской практике. Особенно часто это делается при определении вирусных и инфекционных патологий.

Эти же анализы применяются при проведении географического скрининга и медицинского обследования с целью предупреждения эпидемиологического распространения инфекции.

К достоинствам метода можно отнести:

• Высокий уровень достоверности.
• Быстрое проведение реакции и получение результатов. Результаты РСК известны уже через 24 часа. При особой ситуации, в условиях стационара, анализ будет готов через несколько часов.
• Осуществление контроля развития болезни и эффективности проводимой терапии.
• Невысокая стоимость и доступность для пациентов.

Минусы метода

Однако серологические исследования имеют и свои недостатки.

К ним относится тот факт, что при проведении анализа следует учитывать инкубационный период заболевания, для того чтобы получить более достоверную картину.

К примеру, определение простого герпеса первого или второго типа возможно лишь спустя 14 дней с момента заражения. Анализ на наличие вируса иммунодефицита проводят через 30 дней, через 90 дней и спустя полгода после контакта с инфицированным человеком.

Безусловно, на достоверность результатов может оказывать влияние и человеческий фактор: пренебрежение правилами подготовки к забору крови или ошибка, допущенная лаборантом при проведении реакции.

По статистике, ошибочный результат может быть получен в 5 % случаев. Опытный врач при обследовании пациента, изучив клиническую картину, в большинстве случаев может вычислить допущенную ошибку.

Какие анализы крови сдают на сифилис: RW, РПГА, ИФА, VDRL, RPR, РИБТ, расшифровка результатов тестов

Сифилис – заболевание инфекционной природы, обусловленное спирохетой Treponema pallidum, склонное к прогредиентному хроническому течению, с чёткой периодизацией клинической симптоматики.

Преобладание полового пути передачи над контактным и трансплацентарным ставит это заболевание в ряд венерических (ЗППП, ИППП). Помимо указанных способов передачи инфекции особую роль играет артифициальный путь (от лат. «artificio» - искусственно созданный).

Он характерен для медицинских учреждений, в основном, реализуется в условиях стационара. Инфицирование происходит при гемотрансфузиях, различных хирургических операциях, инвазивных диагностических методах.

Несмотря на карантинизацию донорской крови, проблема выявления сифилиса у доноров на разных стадиях заболевания все ещё актуальна.

Поэтому диагностические мероприятия при сифилисе требуют стандартизации, внедрения новых чувствительных и информативных методов идентификации, а также сведения к минимуму ошибок и неправильной трактовки результатов анализов.

Классификация методов лабораторной диагностики

Диагностика сифилиса имеет некоторые особенности и отличается от диагностики других бактериальных инфекций. Сложное строение и антигенные свойства бледной трепонемы обусловливают ошибки в интерпретации результатов серологических реакций.

Сдать анализ крови на сифилис предлагают 3 основным группам пациентов:

1. 1 Скрининг и диспансеризация групп населения (в том числе и беременность, постановка на учет в женской консультации, поступление на работу и оформление медкнижки и так далее).
2. 2 Скрининг в группах риска (незащищенные половые контакты с человеком, инфицированным сифилисом, лица после принудительных сексуальных контактов, ВИЧ-инфицированные и так далее).
3. 3 Лица, имеющие симптомы заболевания, или лица с подозрением на сифилитическую инфекцию.

Все лабораторные методы условно подразделяют на прямые и непрямые.

Прямые методы

1. 1 Идентификация Treponema pallidum в тёмном поле (темнопольная микроскопия).
2. 2 Заражение подопытных животных (культивирование в лабораторных животных).
3. 3 ПЦР (полимеразно-цепная реакция).
4. 4 ДНК-зонд или гибридизация нуклеиновых кислот.

Непрямые методы

Серологические реакции - это методы лабораторной диагностики, базирующиеся на обнаружении антител (сокращенно АТ) к антигенам бледной трепонемы (сокращенно АГ). Они имеют основное значение для подтверждения диагноза.

1. 1 Нетрепонемные тесты:
   • Реакция Вассермана (РСК);
   • Реакция микропреципитации (МР, РМП) и ее аналоги, которые приведены ниже;
   • Тест быстрых плазменных реагинов (RPR, РПР);
   • Тест с красным толуидином и сывороткой (TRUST);
   • Нетрепонемный тест Лаборатории исследования венерических болезней - VDRL.
2. 2 Трепонемные тесты:
   • Р-ция иммобилизации Treponema pallidum – РИБТ/РИТ;
   • Р-ция иммунофлюоресценции – РИФ, FTA (разведения сывороток РИФ-10, РИФ-200, РИФ-абс);
   • Р-ция пассивной гемагглютинации (РПГА, ТРПГА, TPHA);
   • Иммуноферментный анализ (ИФА, EIA);
   • Иммуноблоттинг.

Рисунок 1 - Алгоритм серодиагностики сифилиса

Гистоморфологические методы

Эти методы сводятся к выявлению особенностей гистоморфологии сифилитических проявлений. Внимание уделяется тонкостям строения твёрдого шанкра. Однако, дифференциальная диагностика инфекции с помощью гистологии весьма затруднительна. Гистоморфология используется с другими лабораторными и клиническими тестами.

Микроскопия Treponema pallidum в тёмном поле

Этот метод основывается на непосредственном обнаружении бледной трепонемы в исследуемом материале с помощью микроскопа и специальных приспособлений (чаще всего отделяемое эрозий и язв, реже спинномозговая жидкость и другие субстраты).

С помощью скарификации, соскоба, сдавливания с эрозий и язвенных дефектов получают экссудат, затем исследуют в микроскоп подготовленный препарат.

Обычно бледные трепонемы выявляют в препарате, полученном из шанкра, из очагов вторичного свежего, вторичного рецидивного сифилиса, а также пунктата лимфоузлов, плаценты.

Основанный на феномене свечения мелких частиц в тёмном поле при попадании луча света (феномен Тиндаля), метод прекрасно позволяет дифференцировать возбудителя сифилиса от других трепонем на основании морфологических отличий и отличий в способах передвижения бактерии.

Для микроскопии используют специальный темнопольный конденсор соответствующего оптического разрешения. Препарат получают способом раздавленной капли (каплю материала наносят на чистое обезжиренное предметное стекло и закрывают очень тонким покровным).

На покровное стекло капают иммерсионное масло. С помощью поворота тубуса и поворота увеличивающей линзы регулируют нужное освещение.

В тёмном поле микроскопа обнаруживаются клетки крови, эпителиальные клетки и сам возбудитель сифилиса. Бледная трепонема выглядит как спираль, очень тонкая, излучающая серебристый цвет, с плавными движениями.

Рисунок 2 - Темнопольная микроскопия как способ визуализации бледной трепонемы в исследуемом материале. Источник иллюстрации - CDC

Treponema pallidum необходимо отличать от других трепонем, в том числе и Tr. refringens, которая может содержаться в ротоглотке и на слизистой половых органов. Эта бактерия совершает хаотичные движения, имеет широкие и несимметричные, довольно грубые завитки. Кроме того, Treponema pallidum отличают от Tr. Microdentium, Tr. Buccalis и Tr. vincenti.

Визуализация бактерий в тёмном поле иногда дополняется реакцией флюоресценции. Для этого меченые флюоресцирующим красителем противотрепонемные АТ добавляют в нативный материал. При этом образуется комплекс, называемый антиген-антитело (сокращенно АГ-АТ), который и является объектом для исследования с помощью люминесцентного микроскопа.

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

ПЦР, разработанная в 1991 году для обнаружения молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) бледной трепонемы, является высокочувствительным и специфичным, позволяет выявить фрагменты ДНК возбудителя.

Базируется данный анализ на копировании коротких участков ДНК бледной спирохеты, который удовлетворяет заданным параметрам и присутствует в образце. Всё это выполняется в искусственных условиях (in vitro). Реакция проводится в приборе - амплификаторе, который обеспечивает периодизацию температурных циклов. Происходит охлаждение с последующим нагреванием пробирок с погрешностью в 0,1˚С.

ДНК-матрицу прогревают в течение 2 минут при температуре 92-98˚С (максимальная температура используется, если полимераза термостабильна). При нагревании цепи ДНК расходятся из-за распада водородных связей между ними. В стадии отжига температуру реакции снижают для связывания праймера с одноцепочечной матрицей.

Отжиг занимает около 30 секунд, в течение этого времени синтезируются сотни нуклеотидов. Вновь синтезируемые молекулы копируются полимеразой, в результате многократно увеличиваются специфические фрагменты дезоксирибонуклеиновой кислоты. Последующая детекция фрагментов проводится с помощью электрофореза в геле агар.

ПЦР-диагностика сифилиса пока носит экспериментальный характер, но оправдана при выявлении врождённой инфекции, в сложных диагностических случаях или при минимальном содержании бледных трепонем в исследуемом материале.

ДНК-гибридизация

ДНК-гибридизация выполняется in vitro и основана на полном или частичном соединении двух одноцепочечных молекул ДНК в одну молекулу. В случае полного соответствия комплементарных фрагментов объединение происходит легко. Если комплементарное соответствие частичное, то объединение цепочек ДНК происходит медленно. На основании времени слияния цепей можно оценить степень комплементарности.

При нагреве ДНК в буферном растворе разрываются водородные связи азотистыми основаниями, являющимися комплементарными, в результате цепочки ДНК расходятся. Далее получают препарат из двух денатурированных дезоксирибонуклеиновых кислот. При охлаждении одноцепочечные участки ренатурируют. Образуется так называемый гибрид ДНК.

Метод позволяет оценить и анализировать скорость отжига, учитывая особенности (сходства и различия) ДНК между видами или внутри вида.

Применение ДНК-зонда заключается в гибридизации меченого фрагмента ДНК со специфичным участком ДНК для идентификации комплементарных последовательностей нуклеотидов. Для метки зонда используется группа ненасыщенных атомов (хромофоры) или радиоактивные изотопы.

ДНК–зонд применяют для гетерогенного и гомогенного детектирования нуклеиновых кислот. Роль зонда заключается в определении участков, на которых произошло слияние мишень-зонд. Детектирование в гомогенной системе имеет преимущество - позволяет отследить гибридизацию молекул ДНК в реальном времени.

Суть метода сводится в денатурации ДНК и ренатурации (воссоединения цепочек ДНК). Процесс ренатурации нуклеиновой кислоты и ДНК-зонда заканчивается образованием «гибрида».

Специфические последовательности нуклеиновых кислот гибридизуются с ДНК–зондом и, таким образом, выявляются и позволяют оценить количество ДНК в исследуемом материале.

Заражение лабораторных животных

Высокая чувствительность кроликов к Treponema pallidum (порядка 99,9%) позволяет применять их в диагностике сифилитической инфекции.

Заражение кроликов проводится в научно-исследовательских центрах и является «золотым стандартом» оценки чувствительности других методов.

Вернёмся к трепонемным и нетрепонемным тестам, так как они используются чаще всего. Рассмотрим их преимущества и недостатки, а также ошибки в интерпретации результатов.

Нетрепонемные тесты

Это тесты определения антител IgG и IgM к стандартизированному кардиолипиновому антигену. Их существенным недостатком является сравнительно небольшая специфичность.

Низкая стоимость и простота выполнения позволяют отнести эти тесты к отборочным диагностическим, необходимым для установки предварительного диагноза и скрининга среди населения.

Именно нетрепонемные тесты сдаются при оформлении медицинской книжки, устройстве на работу, постановке на учет в женской консультации.

1. 1 Минимальная чувствительность в стадии сифилиса первичного – 70%;
2. 2 Минимальная чувствительность в стадии сифилиса позднего – 30%;
3. 3 Возможность появления ложноотрицательных и ложноположительных результатов;
4. 4 Трудоёмкость выполнения РСК.

1. 1 Относительно маленькая стоимость производства тестов;
2. 2 Получение быстрого ответа;
3. 3 Возможность их применения для скрининга.

Получение ложноположительных или слабоположительных проб возможно в следующих случаях:

1. 1 Нарушение технологии выполнения, при блокировании комплекса АГ-АТ.
2. 2 Наличие у больного аутоиммунных заболеваний (ревматоидный артирит, ревматизм, склеродермия, системная красная волчанка, саркоидоз и др.).
3. 3 Злокачественные новообразования.
4. 4 Вирусные и бактериальные инфекции.
5. 5 Эндокринные заболевания (аутоиммунный тиреоидит, сахарный диабет).
6. 6 Беременность.
7. 7 Употребление алкоголя.
8. 8 Приём жирной пищи.
9. 9 Старческий возраст.

Как видно из списка, существует достаточно причин для неверного результата. Поэтому к нему следует весьма настороженно относиться. Рассмотрим наряду с РСК ещё две пробы. Это реакция микропреципитации и VDLR (ее модификация).

Реакция связывания комплемента (РСК, Вассермана, RW)

Это проба, основанная на способности комплемента связываться с комплексами АГ-АТ. Идентифицируют образовавшийся комплекс с помощью гемолитической системы. Кардиолипиновый антиген заметно повышает чувствительность пробы.

Чувствительной является и реакция Колмера, которая заключается в выполнении при различных температурных режимах. Так, первая фаза реакции Колмера протекает при температуре 20˚С в течение получаса, вторая фаза при тепературе 4-8˚С на протяжении 20-ти часов. За это время происходит связывание комплемента.

При выполнении РСК возможно получение резко положительных результатов. Причиной, вероятно, является большой титр антител в неразведенной сыворотке. В этом случае пробы ставят с уменьшающими дозами.

Для дифференцировки стадий сифилиса и оценки эффективности противосифилитического лечения определяют количество АТ в сыворотке.

Позитивность пробы оценивают с помощью крестов, также в реакциях Вассермана, Колмера и Канна указывается разведение сыворотки.

Реакция микропреципитации

Так как трудоёмкость выполнения вышеуказанных проб велика, то для широты обхвата диспансеризацией разных групп населения разработан ускоренный способ серодиагностики сифилиса, так называемый экспресс-метод – реакция микропреципитации (сокращенно МР, РМП).

Она выполняется с кардиолипиновым антигеном и вспомогательными веществами. Его преимуществом является забор периферической крови для исследования. Это значительно ускоряет и саму методику, и работу лаборантов.

Рисунок 2 - Реакция микропреципитации (схема)

Для проведения МР необходимы плазма или инактивированная сыворотка крови пациента (именно они содержат антитела). Далее плазму помещают в маркированные лунки. Затем, к исследуемому материалу добавляют каплю кардиолипинового антигена, смешивают и встряхивают. В итоге в сыворотке инфицированного появляются характерные хлопья, разные по степени интенсивности.

Это качественная проба. При количественной оценке используются 10 разведений сыворотки, помещаемой в 10 лунок с соответствующей маркировкой. При качественной МР ответ указывается в виде крестов (плюсов) или минуса, при количественной указывается титр антител (1:2, 1:4 и так далее).

Наличие хлопьев расценивается как положительный или слабоположительный ответ. Возможно появление флокулята и при отсутствии заболевания, поэтому окончательную оценку полученного результата проводят после контрольного исследования или проведения других реакций (РИБТ, РИФ, ИФА, РПГА).

Рекомендованный Всемирной организацией здравоохранения метод постановки реакции с антигеном липоидной природы (АГ) по праву считается лучшим среди других стандартных нетрепонемных тестов. Разработан в США, штате Джорджиа в лаборатории венерических болезней (Veneral Diseases Research Laboratories).

Аббревиатура учреждения послужила названием для пробы – VDRL. VDRL - это модификация МР. Сыворотку от больного сифилисом инактивируют и помещают на предметное стекло. Используемый антиген состоит из кардиолипина, холестерина и лецитина в разном процентном соотношении. Ответ регистрируется практически сразу.

Отчётливая флокуляция возникает в присутствии в сыворотке антител. Сыворотка становится реактивна по прошествии 4-х недель после заражения. Для оценки количества антител, сыворотку предварительно разводят в геометрической прогрессии.

1. 1 сравнительно высокая чувствительность;
2. 2 сравнительно высокая специфичность;
3. 3 легкость выполнения;
4. 4 малая стоимость реактивов;
5. 5 получение быстрого ответа.

Недостатком VDRL является относительно высокая частота ложноположительных результатов.

Их причинами являются всё те же перечисленные выше заболевания.

Трепонемные тесты исполняются со специфическими АГ Treponema pallidum. Они необходимы и обязательны для установления окончательного диагноза. Это реакция иммунофлюоресценции (РИФ), реакции непрямой гемагглютинации (РПГА), иммуноферментный анализ (ИФА) и др.

После положительного результата нетрепонемного теста (RPR, MP, VDRL) всегда должны выполняться трепонемные (чаще комбинация - РПГА, ИФА, РИФ).

Трепонемные тесты более сложны в исполнении, чем экспресс-тесты, и требуют больших затрат денежных средств.

Данная реакция (сокращенно РИФ) используется для диагностики сифилиса, в том числе и скрытых форм, и перепроверки положительных и ложноположительных проб.

РИФ основана на свечении меченых антител при соединении с комплексом антиген-антитело под кварцевой лампой. Метод начал применяться в 60-х годах и отличался простотой выполнения и высокой специфичностью (которая немного уступает РИБТ).

Он имеет несколько модификаций: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-abs.

Наиболее чувствительна РИФ в разведении 10 раз, а остальные - более специфичны. РИФ проводится в двух фазах. К АГ добавляют сыворотку крови пациента. Образуется комплекс АГ-АТ, который исследуется в следующей фазе. Далее меченный с помощью флюоохрома комплекс идентифицируют при микроскопии. Если не наблюдается свечение, это указывает на отсутствие специфических АТ в сыворотке крови.

РИФ-200 является наиболее ценным из всех разведений. Метод предназначен для диагностики различных форм сифилиса, особенно скрытого сифилиса и перепроверки положительных проб.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (сокращено РИБТ, РИТ) одна из сложных серологических проб, требующих значительных усилий и финансовых затрат. РИБТ применяют все реже, но актуальность ее сохраняется в диагностике скрытого сифилиса.

Большое значение она несёт в распознавании ложноположительных результатов у беременных женщин и основывается на иммобилизации бактерий в присутствии иммобилизинов – поздних антител.

Результат оценивается на процентном количестве (%) иммобилизированных трепонем с помощью специальной таблицы:

1. 1 От 0 до 20 - отрицательная проба.
2. 2 От 21 до 50 - слабоположительная проба.
3. 3 От 50 доположительная реакция.

Ложноположительные результаты также возможны при применении РИБТ. Так, неверный ответ возможен при инфицировании тропическими трепанематозами, а также, при туберкулёзе, циррозе печени, саркоидозе и пациентов старческого возраста.

Этот анализ крови на сифилис называется реакцией пассивной гемагглютинации (сокращенно, кровь на РПГА, ТРПГА).

Антиген для РПГА приготавливают из эритроцитов барана, покрытых фрагментами бледных трепонем (полученных от инфицированных кроликов (см. рисунок 4)). Для анализа используется венозная кровь (плазма или инактивированная сыворотка) пациента.

При добавлении антигена в сыворотку пациента с сифилисом происходит образование комплекса АГ-АТ, который приводит к агглютинации эритроцитов. агглютинация определяется субъективно врачом-лаборантом.

Рисунок 3 - Схема РПГА (реакция пассивной гемагглютинации)

Проба оценивается как положительная при появлении агглютинатов равномерной розовой окраски. Окрашивание преципитата в красный свидетельствует об осаждении эритроцитов. РПГА является высокочувствительной и высокоспецифичной.

Реакция микрогемагглютинации

Она является упрощённым вариантом РПГА. Отличается от пробы, описанной выше, меньшим количеством антигена, разбавителя и сыворотки крови для выполнения реакции. Через 4 часа после инкубации сыворотки можно оценить пробу. Используется при скрининговых и массовых обследованиях на сифилис.

Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы. Исследуемый материал инкубируют, затем отмывают антитела, не связавшиеся с антигенами (см. рисунок 5).

Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы. Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.

Рисунок 4 - Схема ИФА (иммуноферментного анализа)

Чувствительность ИФА составляет более 95% . Метод используется в автоматизированном режиме для исследования декретируемых групп населения: доноров, беременных и других, для уточнения диагноза при положительных и ложноположительных нетрепонемных тестах.

Иммуноблоттинг

Иммуноблоттинг – высокочувствительный метод, модификация простого ИФА. Реакция основана на электрофорезе с разделением антигенов бледных трепонем.

Разделенные иммунодетерминанты переносят на нитроцеллюлозную бумагу и проявляют в ИФА. Далее инкубируют сыворотку и смывают не связавшиеся антитела. Полученный материал обрабатывают иммуноглобулинами (IgМ или IgG), меченными ферментом.

Клиническая оценка результатов лабораторной диагностики сифилиса

В таблице 1 ниже мы привели возможные результаты анализов и их расшифровку. Как можно видеть в таблице, основное значение при расшифровке имеет комплексная оценка тестов.

Таблица 1 - Расшифровка результатов серологических реакций (анализов крови на сифилис). Для просмотра кликните по таблице

Оценка реактивности тестов выполняется также «крестами»:

1. 1 Максимальный ответ (резко положительная проба) обозначается с помощью 4-х крестов.
2. 2 Положительная проба обозначается с помощью 3-х крестов.
3. 3 Слабоположительную реакцию обозначают двумя крестами.
4. 4 Один крест свидетельствует о сомнительном и отрицательном результате.
5. 5 Отрицательный ответ маркируют знаком «минус».

Проблема оптимизации лабораторной диагностики сифилиса не потеряла свою актуальность до настоящего времени. Современные методы диагностики, несмотря на стремление учёных привести диагностику к максимально высоким показателям чувствительности и специфичности, требуют контрольной проверки и индивидуального подхода.

Особенностью сифилитической инфекции является феномен серорезистентности, который так и не получил научного объяснения. Диагноз выставляется после полноценного обследования больного эпидемиологическими, клиническими, лабораторными методами.

На фоне экономико-технического развития медицины наблюдается и прогресс в разработке новых критериев диагностики сифилиса. Всё это позволит быстро, успешно и безошибочно лечить пациентов.

Серологический метод диагностики предусматривает применение 2 направлений исследований: серодиагностики (выявление специфических антител в сыворотке крови обследуемых) и сероидентификация (определение антигенных свойств выделенного возбудителя с целью установления его вида и типа).

При серодиагностике применяются реакции агглютинации, преципитации, лизиса, РСК, реакции с использованием меченых антигенов или антител. Компонентами этих реакций являются: сыворотки крови обследуемых больных и стандартные антигенные препараты. Целью исследований являются определение титров антител к возбудителям инфекционных заболеваний в исследуемых сыворотках.

Выявление высоких титров специфических антител особенно если они достигают уровня так называемых «диагностических» титров, подтверждает предполагаемый диагноз. Большое значение придается исследование парных сывороток, когда одновременно титруются сыворотки взятые в самом начале заболевания (3-4ый день) и сыворотки, полученные на 7-й - 10-й день заболевания. Диагностическое значение имеет 4-кратное нарастание титров антител.

При сероидентификации чаще других используется реакция агглютинации на стекле. Компоненты реакции: выращенная чистая культура возбудителя заболевания (антиген) и стандартные диагностические иммунные кроличьи сыворотки (антитела).

Достоинство серологического метода - простота, доступность, высокая чувствительность, специфичность, экспрессность.

Недостатки: необходимость дорогостоящих стандартных препаратов и аппаратуры.

Аллергологический метод

Данный метод предусматривает выявление сенсибилизации организма к тому или иному инфекционному агенту, что имеет большое диагностическое значение. Известно, что течение некоторых инфекционных заболеваний сопровождается формированием гиперчувствительности замедленного типа. В связи с этим внутрикожное введение таким больным малых доз аллергена вызывает соответствующую реакцию со стороны организма, вызванную повторной встречей с аллергеном. Реакция протекает по замедленному типу, и на месте введения аллергена через 48-72 часа появляется покраснение, припухлость, иногда - инфильтрат (положительная реакция). Если организм не сенсибилизирован, внутрикожное введение не вызовет никакой реакции со стороны организма (отрицательная реакция). Промышленностью выпускаются специальные препараты для проведения кожно-аллергических проб: туберкулин, дизентерин, бруцеллин, тулярин и др.

Аллергологический метод имеет особенно большое значение в тех случаях, когда выявление возбудителя инфекционного заболевания затруднено или же невозможно (например, при лепре) или когда для этого требуется много времени (например, при бруцеллезе). Проба с туберкулином используется на практике не только с диагностической целью, но и для определения сроков ревакцинации детей вакциной БЦЖ, а также для изучения коллективного противотуберкулезного иммунитета.

Достоинства аллергологического метода - его простота, достоверность, экспрессность.

Недостаток - ограниченность применения, так как далеко не при всех инфекционных заболеваниях формируется гиперчувствительность замедленного типа.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ В ДИАГНОСТИКЕ

ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

В настоящее время иммунологические методы исследования широко применяются для лабораторной диагностики инфекционных и неинфекционных заболеваний.

Реакции взаимодействия между антигенами и антителами называются серологическими (serum – сыворотка, logos – учение).

Суть всех серологических реакций состоит в специфическом соединении антигенов и соответствующих им антител с образованием комплекса. Серологическая реакция возможна, если имеется иммунологическое соответствие (гомологичность) – главных компонентов – антигенов и антител. В основе иммунологической специфичности лежит структурная комплементарность антигена и антитела.

Процесс взаимодействия антигенов и антител протекает в две фазы – специфическую и неспецифическую. Первая фаза развивается быстро. Она состоит из специфического соединения активного центра антитела с детерминантными группами соответствующего (гомологичного) антигена. Более медленно развивается последующая фаза, неспецифическая – это внешнее проявление реакции антиген-антитело (выпадение хлопьев, помутнение среды и т. д.)

Серологические реакции применяются с двумя целями:

1) для выявления антител в исследуемой сыворотке с помощью известных антигенов (серодиагностика);

2) для установления неизвестного антигена с помощью известных сывороток (сероидентификация).

Определение неизвестного антигена при микробиологических исследованиях проводится с целью установления родовой, видовой, типовой принадлежности возбудителей, выделенных у обследуемого. В таких случаях из двух основных компонентов реакции (антитело, антиген) неизвестным является антиген, реакция должна проводиться с заведомо известными антителами. При этом антигеном является чистая культура выделенных из исследуемого материала микроорганизмов. В качестве заведомо известных антител применяются иммунные диагностические сыворотки. Последние получают из крови животных (чаще всего кроликов), предварительно иммунизированных соответствующими бактериальными антигенами. Иммунные сыворотки должны содержать высокий уровень специфических антител.

Помимо этого, серологические реакции могут использоваться для определения различных небактериальных антигенов: для установления групп крови, тканевых антигенов, опухолей, для подбора пар донор – реципиент при трансплантации органов и тканей и т. д.

Серологические реакции могут применяться и для обнаружения антител в сыворотке крови. В таких случаях требуется заведомо известный антиген (диагностикум). В качестве антигенов могут быть использованы взвеси живых или убитых микробов, экстракты или изолированные химические фракции из них.

Многочисленные серологические реакции, применяемые в настоящее время в практике здравоохранения, различаются по феномену, выявляющему связь антигена и антитела. Видимое проявление реакции будет различным в зависимости от того, какая методика используется, в каком физическом состоянии применяется антиген или иммунная сыворотка, участвует ли в реакции комплемент. Например, если используется корпускулярный антиген, имеет место феномен агглютинации – склеивание частиц (реакция агглютинации). Поскольку корпускулярные антигены состоят из частиц относительно крупного размера, выпадает видимый хлопьевидный осадок. Если же в реакции применяется растворимый антиген, наблюдается выпадение мелко зернистого осадка – преципитата (реакция преципитации). В случае, если в реакцию взаимодействия бактериальных антигенов и иммунной сыворотки вводится и комплемент, происходит бактериолиз (растворении бактериальных антигенов) или лизис эритроцитов (когда они используются в качестве антигена). Применение в серологических реакциях иммунных сывороток, меченых флюорохромами, ферментами или радиоизотопами, позволяет установить специфическое связывание антигенов с антителами по соответствующему феномену (свечение, изменение цвета или активности радиоизотопной метки).

Для оценки серологических реакций применяются такие критерии, как специфичность и чувствительность. Специфичность – это способность антигенов реагировать только с гомологичными антителами. Чувствительность – способность к специфическому взаимодействию при минимальных количествах антигенов и антител.

Реакция агглютинации

Реакция агглютинации (РА) – специфическое взаимодействие антигенов с антителами, выражающееся в склеивании антигенов под воздействием антител сыворотки и выпадении их в осадок в присутствии электролита. Была первой из предложенных серологических реакций.

Особенность реакции агглютинации состоит в том, что в качестве антигенов при её постановке используются клетки или другие корпускулярные частицы. Реакция основана на способности корпускулярных антигенов специфически соединяться, с гомологичными антителами иммунных сывороток с образованием осадка в виде зерен, хлопьев, комочков. Реакция проходит только в присутствии электролитов. Антигены, применяемые в реакции, называются агглютиногенами, антитела – агглютининами, а образующийся осадок – агглютинатом.

В качестве антигена в реакции агглютинации можно применять взвесь живых культур в изотоническом растворе хлорида натрия или микробы, убитые формалином, спиртом или прогреванием, а также эритроциты, лейкоциты или другие клетки.

Источником антител служит известная агглютинирующая сыворотка, полученная путем иммунизации животных соответствующими антигенами, или сыворотка обследуемого больного.

Существуют разные способы постановки реакции агглютинации. Из них наиболее часто применяются: ориентировочная реакция на стекле, развернутая агглютинация в пробирках, реакции гемагглютинации и непрямой гемагглютинации (РНГА).

Похожая информация.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ (лат. serum сыворотка + греч. logos учение) - методы иммунологии, изучающие специфические свойства крови человека или животных с целью выявления антигенов или антител с помощью серологических реакций.

Начало С. и. положено в конце прошлого столетия, после того как было установлено, что соединение антигена с антителом (см. Антиген - антитело реакция) сопровождается рядом доступных визуальному наблюдению феноменов - агглютинацией (см.), преципитацией (см.) или лизисом. Появилась возможность специфического распознавания антигенов (см.) или антител (см.), если один из этих компонентов известен.

В 1897 г. Ф. Видаль сообщил, что сыворотка крови больных брюшным тифом избирательно агглютинирует брюшнотифозные бактерии и поэтому эта реакция (см. Видаля реакция) может быть применена для лаб. диагностики брюшного тифа. В том же году было показано, что фильтраты культур чумных, брюшнотифозных и холерных бактерий при соединении с соответствующими иммунными сыворотками образуют хлопья, или преципитат.

Реакция преципитации оказалась пригодной для обнаружения любых белковых антигенов. В 1900-1901 гг. К. Ландштейнер нашел, что в эритроцитах людей имеются два различных антигена (А и В), а в сыворотках крови два агглютинина (а и Р), что способствовало применению реакции гемагглютинации для определения групп крови (см.).

Реакция агглютинации для определения группы крови и резус-фактора применяется в акушерской практике, при гемотрансфузиях и трансплантации тканей. Антитела против резус-фактора (см.) представляют собой неполные антитела, они не способны к прямой реакции с резус-положительными эритроцитами, поэтому для их обнаружения используют реакцию Кумбса (см. Кумбса реакция), основанную на выявлении неполных антител с помощью антиглобулиновых сывороток. К эритроцитам известной специфичности добавляют исследуемую сыворотку крови, а вслед за этим антиглобулиновую сыворотку против IgG (непрямая реакция Кумбса). Fab-фрагменты неполных антител исследуемой сыворотки крови присоединяются к эритроцитам, а к свободным Fc-фрагментам этих антител присоединяются антитела против IgG, и происходит агглютинация эритроцитов. Для диагностики гемолитической анемии используют прямую реакцию Кумбса, В организме таких больных эритроциты соединяются с циркулирующими в крови антителами против резус-фактора. Чтобы их выявить, к эритроцитам, взятым у больного, добавляют антитела против IgG. Появление агглютинации эритроцитов подтверждает диагноз болезни.

Реакция торможения гемагглютинации - РТГА (см. Гемагглютинация) - основана на феномене предотвращения (торможении) иммунной сывороткой гемагглютинации эритроцитов вирусами. Феномен вирусной гемагглютинации не является серол. реакцией и происходит в результате соединения вируса с рецепторами эритроцитов, однако РТГА представляет собой серологическую реакцию, используемую для выявления и титрования противовирусных антител. РТГА - основной метод серодиагностики гриппа, кори, краснухи, эпидемического паротита, клещевого энцефалита и других вирусных инфекций, возбудители к-рых обладают гемагглютинирующими свойствами.

Реакция пассивной, или непрямой, гемагглютинаций, В ней используют эритроциты или нейтральные синтетические хчатериалы (напр., частицы латекса), на поверхности к-рых сорбированы антигены (бактериальные, вирусные, тканевые) или антитела (см. Бойдена реакция). Агглютинация их происходит при добавлении соответствующих сывороток или антигенов. Эритроциты, сенсибилизированные антигенами, называют антигенным эритроцитарным диагностикумом и используют для выявления и титрования антител. Эритроциты, сенсибилизированные антителами, называют иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагностикумами (см.) и используют для выявления антигенов:

Реакция пассивной гемагглютинации применяется для диагностики заболеваний, вызванных бактериями (брюшной тиф и паратифы, дизентерия, бруцеллез, чума, холера и др.), простейшими (малярия) и вирусами (грипп, аденовирусные инфекции, клещевой энцефалит, крымская геморрагическая лихорадка и др.). Реакция пассивной гемагглютинации по чувствительности не уступает методу выделения вируса при ареновирусных болезнях (см.), в частности при лимфоцитарном хориоменингите. Вирусный антиген лимфоцитарного хориоменингита выявляется у вирусоносителей (домовых мышей) в реакции пассивной гемагглютинации с суспензиями извлеченных органов, разведенными в десятки тысяч раз. При сальмонеллезе в реакции пассивной гемагглютинации определяются бактерии при концентрации до нескольких сотен микробных тел в 1 г фекалий, дизентерийные бактерии в пищевых продуктах выявляются при содержании в 1 г материала не менее 500 микробных тел.

Реакция пассивной гемагглютинации используется в диагностике и профилактике вирусного гепатита В. В Советском Союзе для выявления HBs-антигена (см. Австралийский антиген) в крови больных с острым гепатитом В производится диагностикум, представляющий собой эритроциты кур, сенсибилизированные козьим иммуноглобулином против HBs-антигена. Каплю диагностикума соединяют с равным объемом сыворотки крови обследуемых людей, и, если в ней присутствует HBs-антиген, происходит агглютинация. Реакция способна уловить до 1,5 нг/мл HBs-антигена. Для обнаружения HBs-антител используют эритроциты с сорбированным на них HBs-антигеном, выделенным из крови больных. Реакцию пассивной гемагглютинации применяют также для выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам, напр, пенициллину или инсулину. В этом случае эритроциты 0 группы крови человека сенсибилизируют лекарственным веществом и затем используют для выявления к нему агглютининов в сыворотке крови больного.

Реакцию пассивной гемагглютинации используют для выявления гонадотропного гормона в моче с целью установления беременности (см. Хорионический гонадотропин). Для этого стандартная сыворотка к этому гормону инкубируется с исследуемой мочой. При последующем добавлении эритроцитов с сорбированным на них гормоном агглютинация не наступает (положительный ответ), т. к. содержащийся в моче гормон нейтрализовал агглютинирующие антитела.

Реакции, основанные на феномене преципитации

Их используют для определения самых разнообразных антигенов и антител. Простейшим примером качественной реакции является образование непрозрачной полосы преципитации на границе наслоения антигена на антитело в пробирке. Широко применяются различные разновидности реакции преципитации в полужидких гелях агара или агарозы (метод двойной иммунодиффузии по Оухтерлоню, метод радиальной иммунодиффузии, иммуноэлектрофорез), к-рые носят одновременно качественный и количественный характер (см. Иммунодиффузия , Иммуноэлектрофорез).

Для постановки двойной иммунодиффузии наливают слой растопленного геля на стеклянную пластинку и после затвердевания вырезают лунки диаметром 1,5-3 мм. В расположенные по кругу лунки помещают исследуемые антигены, а в центральную лунку - иммунную сыворотку известной специфичности. Диффундируя навстречу друг другу, гомологичные сыворотки и антигены образуют преципитат. При радиальной иммунодиффузии (по методу Манчини) иммунную сыворотку вносят в агар. Антиген, помещенный в лунки, диффундирует через агар, и в результате преципитации с иммунной сывороткой вокруг лунок образуются непрозрачные кольца, внешний диаметр к-рых пропорционален концентрации антигена. Модификацию этой реакции используют в диагностике гриппа для распознавания IgM- и IgG-антител (см. Иммуноглобулины). В агар вносят гриппозный антиген, а в лунки сыворотки крови. Затем пластины обрабатывают иммунными сыворотками против IgM- или IgG-антител, что способствует выявлению реакции соответствующих антител с антигенами. Метод позволяет одновременно определять титры антител и принадлежность их к определенному классу иммуноглобулинов.

Разновидностью иммуноэлектрофореза является радиоиммунофорез. В этом случае после электрофоретического разделения антигенов в канавку, вырезанную параллельно движению антигенов в геле, наливают сначала меченную радиоактивным йодом иммунную сыворотку против определяемых антигенов, а затем иммунную сыворотку против IgG-антител, к-рая преципитирует образовавшиеся комплексы антитела с антигеном. Все несвязавшиеся реагенты вымывают, а комплекс антиген - антитело обнаруживают методом авторадиографии (см.).

Реакции с участием комплемента. Реакции с участием комплемента (см.) основаны на способности субкомпонента комплемента Cl(Clq) и затем других компонентов комплемента присоединяться к иммунным комплексам.

Реакция связывания комплемента позволяет титровать антигены или антитела по степени фиксации комплемента комплексом антиген - антитело. Эта реакция состоит из двух фаз: взаимодействия антигена с испытуемой сывороткой крови (исследуемая система) и взаимодействия гемолитической сыворотки с бараньими эритроцитами (индикаторная система). При положительной реакции в исследуемой системе происходит связывание комплемента, и тогда при добавлении сенсибилизированных антителами эритроцитов не наблюдается гемолиза (см. Реакция связывания комплемента). Реакция широко применяется для серодиагностики висцерального сифилиса (см. Вассермана реакция) и вирусных инфекций (см. Вирусологические исследования).

Цитолиз. Антитела против клеточных структур могут при участии комплемента растворять клетки, несущие эти структуры. Лизис эритроцитов легко оценивать по степени и интенсивности освобождения гемоглобина. Лизис нуклеарных клеток оценивают путем подсчета процента мертвых клеток, к-рые не окрашиваются метиленовым синим. Часто также используют радиоактивный хром, к-рый предварительно химически связывают с клетками. Число разрушенных клеток определяют по количеству несвязанного хрома, освобождающегося при лизисе клеток.

Реакция радиального гемолиза эритроцитов может протекать в геле. Взвесь эритроцитов барана помещают в агарозный гель, добавив туда комплемент; в застывшем на стекле слое делают лунки и вносят в них гемолитическую сыворотку. Вокруг лунок в результате радиальной диффузии антител будет образовываться зона гемолиза. Радиус зоны гемолиза прямо пропорционален титру сыворотки. Если сорбировать на эритроцитах какой-либо антиген, напр, гликопротеиновый гемагглютинин вируса гриппа, краснухи или клещевого энцефалита, то можно воспроизвести феномен гемолиза иммунными сыворотками к этим вирусам. Реакция радиального гемолиза в геле нашла применение в диагностике вирусных инфекций благодаря простоте постановки, нечувствительности к сывороточным ингибиторам, возможности титровать сыворотки крови по диаметру зоны гемолиза, не прибегая к серийным разведениям.

Иммунное прилипание. Эритроциты, тромбоциты и другие клетки крови имеют на поверхности рецепторы к третьему компоненту комплемента (C3). Если к антигену (бактерии, вирусы и др.) добавить соответствующую иммунную сыворотку и комплемент, то образуется комплекс антиген - антитело, покрытый C3-компонентом комплемента. При смешивании с тромбоцитами благодаря C3-компоненту комплемента комплекс антиген - антитело осядет на клетках и вызовет их агглютинацию (см. Иммунное прилипание). Эта реакция применяется для определения антигенов системы HLA (см. Иммунитет трансплантационный) и при изучении ряда вирусных -инфекций (клещевой энцефалит, лихорадка денге), к-рые сопровождаются иммунопатол. процессами и циркуляцией в крови вирусных антигенов в комплексе с антителами.

Реакция нейтрализации основана на способности антител нейтрализовать нек-рые специфические функции макромолекулярных или растворимых антигенов, напр, активность ферментов, токсины бактерий, болезнетворность вирусов. В бактериологии эта реакция используется для обнаружения антистрептолизинов, антистрептокиназы и антистафилолизинов. Реакцию нейтрализации токсинов можно оценивать по биол. эффекту, так, напр., титруют антистолбнячные и антиботулинические сыворотки (см. Токсин - антитоксин реакция). Смесь токсина с антисывороткой, введенная животным, предотвращает их гибель. Различные варианты реакции нейтрализации применяют в вирусологии. При смешивании вирусов с соответствующей антисывороткой и введении этой смеси животным или в клеточные культуры патогенность вирусов нейтрализуется.

Реакции с использованием химических и физических меток

Иммунофлюоресценция, разработанная Кунсом (А. Н. Coons) в 1942 г., заключается в использовании для серол. реакций меченных флюорохромом сывороток (см. Иммунофлюоресценция). Меченная флюорохромом сыворотка образует с антигеном комплекс антиген - антитело, к-рый становится доступным наблюдению под микроскопом в ультрафиолетовых лучах, возбуждающих свечение флюорохрома. Реакцию прямой иммунофлюоресценции используют для изучения клеточных антигенов, выявления вируса в зараженных клетках и обнаружения бактерий и риккетсий в мазках. Так, для диагностики бешенства отпечатки кусочков мозга животных, подозреваемых на вирусоносительство, обрабатывают люминесцирующей антирабической сывороткой. При положительном результате в протоплазме нервных клеток наблюдаются глыбки ярко-зеленого цвета. На обнаружении антигенов вирусов в клетках отпечатков со слизистой оболочки носа основана экспресс-диагностика гриппа, парагриппа и аденовирусной инфекции.

Более широко применяется метод непрямой иммунофлюоресценции, основанный на выявлении комплекса антиген - антитело с помощью люминесцирующей иммунной сыворотки против IgG-антител и используемый для обнаружения не только антигенов, но и титрования антител. Метод нашел применение в серодиагностике герпеса, цитомегалип, лихорадки Ласса. В лаборатории должен храниться при г°-20° запас препаратов антигенсодержащих клеток, напр, выращенные на кусочках тонкого стекла и зараженные вирусом клетки VERO или куриные фибробласты, зафиксированные ацетоном. На препараты наслаивают исследуемую сыворотку крови, помещают препарат в термостат при f 37° для образования иммунных комплексов, а затем после отмывания несвязавшихся реагентов выявляют эти комплексы меченой люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека. Применяя меченые иммунные сыворотки против IgM-или IgG-антител, можно дифференцировать тип антител и обнаруживать ранний иммунный ответ по наличию IgM-антител.

В энзим - иммунологическом методе применяют антитела, конъюгированные с ферментами, гл. обр. пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой. Чтобы обнаружить соединение меченой сыворотки с антигеном, добавляют субстрат, разлагающийся присоединенным к сыворотке ферментом с появлением окрашивания в желто-коричневый (пероксидаза) или желто-зеленый (фосфатаза) цвет. Используют также ферменты, разлагающие не только хромогенный, но и люмогенный субстрат. В этом случае при положительной реакции появляется свечение. Подобно иммунофлюоресценции, энзимиммунологический метод применяют для обнаружения антигенов в клетках или титрования антител на антигенсодержащих клетках.

Наиболее популярной разновидностью энзим-иммунологического метода является иммуносорбция. На твердом носителе, к-рым могут быть целлюлоза, полиакриламид, декстран и различные пластмассы, сорбируют антиген. Чаще носителем служит поверхность лунок микропанелей. В лунки с сорбированным антигеном вносят исследуемую сыворотку крови, затем меченную ферментом антисыворотку и субстрат. Положительные результаты учитывают по изменению цвета жидкой среды. Для обнаружения антигенов на носитель сорбируют антитела, затем вносят в лунки исследуемый материал и проявляют реакцию меченной ферментом антимикробной сывороткой.

Радиоиммунологический метод основан на применении радиоизотопной метки антигенов или антител. Первоначально он был разработан как специфический метод измерения уровня циркулирующих в крови гормонов. Тест-системой являлся меченный изотопом гормон (антиген) и антисыворотка к нему. Если к такой антисыворотке добавить материал, содержащий искомый гормон, то он свяжет часть антител, при последующем внесении меченого титрованного гормона с антителами свяжется уменьшенное по сравнению с контролем его количество. Результат оценивают по сопоставлению кривых связанной и несвязанной радиоактивной метки. Эта разновидность метода носит название конкурентной реакции. Существуют и другие модификации радиоиммунологического метода. Радиоиммунологический метод - наиболее чувствительный метод определения антигенов и антител, используемый для определения гормонов, лекарственных веществ и антибиотиков, для диагностики бактериальных, вирусных, риккетсиозных, протозойных заболеваний, исследования белков крови, тканевых антигенов.

Сравнительная характеристика и использование методов серологических исследований в медицинской практике

Методы С. и. непрерывно совершенствуются в направлении повышения чувствительности и универсальности использования. Изначально серол. диагностика основывалась на выявлении антител. С появлением в середине 20 в. реакций иммунофлюоресценции и пассивной гемагглютинации, обладающих большей чувствительностью, появилась возможность обнаруживать не только антитела, но и антиген непосредственно в материале от больных. Энзим-иммунологический и радиоиммунологический методы, по чувствительности на 2-3 порядка превышающие иммунофлюоресценцию и пассивную гемагглютинацию, приближаются к методам биол. обнаружения бактерий и вирусов. Область их применения для обнаружения как антигенов, так и антител теоретически не ограничена.

Серодиагностика инф. болезней базируется на появлении антител к выделенному или предполагаемому возбудителю независимо от того, был ли обнаружен возбудитель в острой стадии болезни. Исследуют пары сывороток крови, взятых в начале болезни и 2-3 нед. спустя. Прирост антител во второй сыворотке крови не менее чем в 4 раза по сравнению с первой является диагностически значимым. Имеет также значение, каким классом иммуноглобулинов представлены антитела. IgM-антитела обнаруживают в конце острого периода болезни и в ранней стадии реконвалесценции. IgG-антитела появляются в более поздние сроки реконвалесценции и циркулируют долго. Если у женщины в первом триместре беременности обнаруживают IgM-антитела к вирусу краснухи, то это служит основанием для прерывания беременности, т. к. в этот период плод особенно чувствителен к вирусу. При разных инф. болезнях избирательно используют наиболее специфические и удобные в исполнении методы.

С. и. широко применяют в эпидемиологии. Систематический сбор и исследование образцов крови различных групп населения позволяют уяснить контакты населения с источником возбудителей инф. болезней. Изучение уровня коллективного иммунитета позволяет выявлять группы повышенного риска и планировать прививочные мероприятия, изучать географическое распространение инфекций. С. и. различных возрастных групп населения позволили, напр., ретроспективно выявить циркуляцию разных вариантов вируса гриппа в определенные периоды времени.

С. и. имеют большое значение в изучении наследственных болезней (см.) и аутоиммунных болезней, сопровождающихся появлением ткане- и органоспецифических антител, разрушающих соответствующие клетки-мишени, а также в онкологии для обнаружения опухолевых антигенов. Так, иммунодиагностика рака печени основана на определении в сыворотке крови больных альфа-фетопротеина и других эмбриональных антигенов методом иммунодиффузии и радиоиммунологическим методом.

Значительный прогресс науки в изучении тонкой антигенной структуры клеточных антигенов, антигенов бактерий и вирусов достигается благодаря применению в серол. реакциях моноклональных антител, к-рые можно получать к отдельным детерминантам антигена.

Библиография: Методы исследований в иммунологии, под ред. И. Лефковитса и Б. Перниса, пер. с англ., М., 1981; Руководство по иммунологии, под ред. О. Е. Вязова и Ш. X. Ходжаева, М., 1973; Руководство по клинической лабораторной диагностике, под ред. В. В. Меньшикова, М., 1982; Immunology, ed. by J.-F. Bach, N. Y., 1978.

С. Я. Гайдамович.

Анализ на сифилис является одним из самых распространенных среди лабораторных исследований. Широко используются анализы на сифилис при проведении профилактических обследований. При помощи микроскопии выявляется возбудитель сифилиса — . При помощи серологических реакций подтверждается диагноз сифилиса, устанавливается диагноз скрытого сифилиса, проводится контроль эффективности лечения, определяется излеченность больных.

Диагноз сифилиса устанавливается на основании клинических данных, обнаружении возбудителей сифилиса в образцах материала и подтверждении диагноза серологическими методами исследования. Проявления сифилиса многочисленны и многообразны, ввиду чего болезнь выявляется врачами разных специальностей. Дифференциальная диагностика первичного сифилиса проводится с целым рядом заболеваний.

Рис. 1. На фото первичное проявление сифилиса — твердый шанкр.

Антитела к бледной трепонеме и серологическая диагностика

При заражении сифилисом в организме больного образуются антитела. Серологическая диагностика помогает врачу изучать динамику образования антител в организме больного сифилисом в начальных стадиях заболевания, в период лечения и после его окончания, решить вопрос рецидив заболевания у больного или повторное заражение (реинфекция), поставить диагноз сифилиса при массовых медицинских условиях.

Антитела к бледной трепонеме IgM

Первыми после заражения начинают вырабатываться антитела IgM. Они начинают выявляться при помощи серологических реакций уже со второй недели после заражения. На 6 — 9 неделях заболевания их количество становится максимальным. Если больной не лечился, то антитела исчезают через полгода. Антитела IgM исчезают через 1 — 2 мес. после , через 3 — 6 мес. — после лечения позднего сифилиса. Если регистрируется их рост, то это служит или говорит о повторном заражении. Молекулы IgM крупные и через плаценту к плоду не переходят.

Антитела к бледной трепонеме IgG

Антитела иммуноглобулины IgG появляются в конце первого месяца (на 4-й неделе) от момента заражения. Их титр выше, чем титр IgM. IgG сохраняются после излечения достаточно длительное время.

Неспецифические антитела

Существует множество серологических реакций. Это объясняется антигенной множественностью бледных трепонем. В сыворотке крови больного человека на разных стадиях сифилиса кроме специфических образуются те или иные неспецифические антитела — агглютинины, комплементсвязывающие, иммобилизины, антитела, вызывающие иммунную флюоресценцию, преципитины и др. Серологические реакции по выявлению неспецифических антител обладают относительной специфичностью поэтому, чтобы избежать диагностических ошибок, следует пользоваться не одним, а комплексом серологических реакций (КСР).

Ложноположительные анализы на сифилис

Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций. Антитела-реагины, которые вырабатываются в крови человека против кардиолипинового антигена, регистрируются не только при сифилисе, но и при других заболеваниях: коллагенозах, гепатитах, заболеваниях почек, тиреотоксикозе, онкозаболеваниях, при инфекционных заболеваниях (лепра, туберкулез, бруцеллез, малярия, сыпной тиф, скарлатина), при беременности и месячных циклах, при приеме жирной пищи и алкоголя. Отмечено, что с возрастом количество ложноположительных реакций возрастает.

Рис. 2. На фото первичный сифилис у женщин.

Лабораторная диагностика сифилиса с применением серологических реакций

Серологические тесты на сифилис подразделяются на трепонемные и нетрепонемные.

1. Нетрепонемные тесты

В качестве антигена в этой группе тестов используется кардиолипиновый антиген. Липидные антигены возбудителей сифилиса самые многочисленные. Они составляют 1/3 сухой массы клетки. С помощью нетрепонемных тестов выявляются антитела-реагины, которые вырабатываются против кардиолипинового антигена. В эту группу входит реакция связывания комплемента (РСКкард), реакция микропреципитации (РМП), реакция быстрого определения реагинов плазмы (RPR) и др. С помощью нетрепонемных тестов проводится первичный скрининг на сифилис (обследование групп населения), а возможность получения результатов в количественном варианте позволяет использовать эти тесты с целью контроля эффективности лечения. Положительные результаты нетрепонемных тестов должны подтверждаться трепонемными тестами. Отличительной особенностью нетрепонемных тестов является получение ложноположительных реакций.

2. Трепонемные тесты

В трепонемных тестах используются антигены трепонемного происхождения, выделенные из культуры бледных трепонем. С их помощью подтверждаются положительные результаты нетрепонемных тестов. В группу входят: РСКтреп — реакция связывания комплемента, РИФ — реакция иммунофлюоресценции и ее модификации, РИТ, РИБТ — реакция иммобилизации бледных трепонем, РПГА — реакция пассивной гемагглютинации, ИФА — иммуноферментный анализ.

3. Тесты на сифилис с использованием рекомбинантных антигенов

Антигены для данной группы тестов получают генно-инженерным путем и используют в реакциях — РПГА и ИФА, в анализах иммуноблоттинга (ИБ) и иммунохроматографическом анализе.

Рис. 3. Для диагностики сифилиса используется комплекс серологических тестов.

Диагностика сифилиса с применением нетрепонемных тестов

Для выявления сифилиса используются нетрепонемные тесты или комплекс серологических реакций (КСР). Серологическая диагностика применятся с 5-й недели от момента заражения или с 2-3 недели после появления . Антитела выявляются практически у всех больных со свежим первичным, . Серологические реакции положительные у 70 — 80% больных с , в 50 — 60% случаев у больных третичным скрытым сифилисом.

Серологические реакции с применением нетрепонемных тестов могут давать ложноположительные результаты.

Рис. 4. Забор крови для проведения анализа на сифилис.

Реакция связывания комплемента (РСК кард, КСК с КА, реакция Вассермана)

Реакция Вассермана (RW, РВ), изобретенная А. Вассерманом более 100 лет назад, сегодня претерпела множество изменений, однако, как дань традиции, сохранила свое название по настоящее время. Реакция связывания комплемента с применением кардиолипинового антигена предназначена не только для выявления антител, но и выполняется в количественном варианте — с разными разведениями сыворотки, что позволяет использовать ее для контроля эффективности лечения. Низкая чувствительность и специфичность, получение ложноположительных результатов — отрицательные стороны данного вида исследования.

Суть реакции Вассермана заключается в следующем: антигены, которые применяются при постановке реакции Вассермана, в случае наличия антител к возбудителям сифилиса в крови человека посредством комплимента связываются с ними и выпадают в осадок. Интенсивность реакции обозначают знаком (+). Реакция может быть отрицательной (-) — отсутствие осадка, сомнительной (небольшой осадок или +), слабоположительной (++), положительной (+++) и резко положительной (++++).

Более чувствительной является видоизмененная реакция Вассермана — реакция Колмера. С ее помощью выявляются антитела в сыворотках, где реакция Вассермана дала отрицательный результат.

При резко положительных реакциях проводится количественное определение реагинов, для чего используется сыворотка в разведениях от 1:10 до 1: 320, что позволяет использовать данный вид исследования для контроля эффективности лечения. Например, снижение титра антител и последующая их серонегативация (получение отрицательных результатов), говорит об успешном излечении заболевания.

Рис. 5. Анализ крови на сифилис — реакция Вассермана.

Микрореакция преципитации (МРП)

Микрореакция преципитации применяется для массовых обследований отдельных групп населения, диагностики сифилиса и контроля над эффективностью лечения. Для проведения данного вида исследования необходимо небольшого количества исследуемого материала. В основе микрореакции преципитации лежит иммунологическая реакция антиген-антитело. В случае наличия антител в сыворотке крови обследуемого комплекс антиген-антитело выпадает в осадок с образованием хлопьев. Реакция проводится в лунках специальной стеклянной пластины. Оценивается по интенсивности выпавшего осадка и величине хлопьев в (+) как реакция Вассермана. При обследовании беременных, доноров и для контроля эффективности лечения не применяется. VDRL и RPR являются разновидностями микрореакций.

Рис. 6. Вид реакции преципитации в капле на стекле.

Рис. 7. Анализ крови на сифилис — реакция микропреципитации.

Рис. 8. Набор для проведения реакции быстрого определения реагинов плазмы (Тест на сифилис RPR).

Все положительные тесты, полученные при проведении неспецифических серологических реакций, требуют подтверждения специфическими реакциями — трепонемными тестами.

Диагностика сифилиса с применением трепонемных тестов

При проведении трепонемных тестов используются антигены трепонемного происхождения. Их отрицательной стороной является невозможность использования для контроля эффективности проводимого лечения, получение положительных результатов при спирохетозах и невенерических трепонематозах и получение ложноположительных результатов при онкологических заболеваниях, лепре, некоторой эндокринной патологии. Такие тесты, как РПГА, ИФА и РИФ остаются положительными многие годы после излечения сифилиса, а в некоторых случаях и пожизненно.

РИБТ и РИФ являются более специфическими из всех серологических реакций, применяемых для диагностики сифилиса. Они позволяют различать ложноположительные реакции, выявлять поздние формы сифилиса, протекающие с отрицательными реакциями. При помощи РИБТ распознаются ложноположительные реакции у беременных, когда необходимо решить вопрос об инфицированности ребенка.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ, РИТ)

Суть реакции заключается в том, что антитела, находящиеся в сыворотке крови больного, обездвиживают бледные трепонемы. Отрицательной считается реакция при иммобилизации до 20% возбудителей, слабоположительная — 21 — 50%, положительная — 50 — 100%. РИБТ иногда дает ложноположительные результаты. Тест сложный и трудоемкий, однако, является незаменимым при проведении дифференциальной диагностики скрытых форм заболевания и ложноположительных результатов серологических реакций, в том числе у беременных. РИБТ дает 100% положительный результат при вторичном, раннем и позднем сифилисе, в 94 — 100% случаев — при других формах сифилиса.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Суть реакции заключается в том, что бледные трепонемы (антигены), соединенные с антителами, меченными флюорохромами, издают в люминесцентном микроскопе желто-зеленое свечение. Результат оценивается знаком (+). С помощью РИФ выявляются иммуноглобулины класса А. Реакция иммунофлюоресценции становится положительной раньше, чем реакция Вассермана. Она всегда положительная при вторичном и латентном сифилисе, в 95 — 100% случаев положительная при третичном и врожденном сифилисе. Техника проведения данного вида исследования проще, чем у РИБТ, но заменить РИФ на РИБТ невозможно, так данная реакция уступает РИБТ по специфичности. РИФ-10 (модификация РИФ) более чувствительна, РИФ-200 и РИФ-абс более специфичны.

Рис. 9. Анализ крови на сифилис — реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Реакция иммунного прилипания бледных трепонем (РИПБТ)

Суть реакции заключается в том, что сенсибилизированные сывороткой больного бледные трепонемы в присутствии комплемента прилипают к поверхности эритроцитов. Полученные комплексы при цетрофугировании выпадают в осадок. Чувствительность данного теста и специфичность близки к РИФ и РИБТ.

Иммуноферментный анализ на сифилис (ИФА)

С помощью ИФА определяются иммуноглобулины класса М и G. Методика IgM – ИФА может быть использована в качестве скринингового и подтверждающего теста. Чувствительность ИФА и его специфичность аналогичны РИФ. При сифилисе ИФА дает положительные результаты с третьего месяца инфицирования и довольно долго (иногда всю жизнь) остается положительным.

Рис. 10. Иммуноферментный анализатор.

Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА)

РПГА основана на способности эритроцитов, на которых адсорбированы антигены бледной трепонемы, в присутствии сыворотки больного склеиваться (гемагглютинация). РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса, в том числе скрытого. При применении высокого качества антигена данный вид серологической реакции превышает все остальные тесты по специфичности и чувствительности.

Рис. 11. РПГА применяется для диагностики всех форм сифилиса.

Рис. 12. Анализ на сифилис — реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (схема).

Рис. 13. Вид перевернутого зонтика, занимающего все дно пробирки, свидетельствует о положительной реакции. В случае, когда эритроциты оседают столбиком («пуговка») в центре дна пробирки говорят об отрицательной реакции.

Рис. 14. Тест РПГА в лабораторных условиях.

Микробиологическая диагностика

Наряду с серологической диагностикой методика обнаружения бледных трепонем (микробиологическая диагностика) играет важную роль, особенно в период серонегативного сифилиса, когда еще в крови отсутствуют антитела, но уже есть первые проявления свежего первичного сифилиса (твердый шанкр).

Биологическим материалом для исследования служит отделяемое с поверхности твердых язв (шанкров), содержимое пустулезных сифилидов, мокнущих и эрозивных папул, пунктаты инфицированных лимфатических узлов, ликвор и амниотическая жидкость, для проведения ПЦР — кровь.

Наилучшей методикой обнаружения возбудителей сифилиса является исследование биологического материала в темном поле микроскопа. Данная методика позволяет увидеть бледные трепонемы в живом состоянии изучить ее особенности строения и движения, отличить патогенные возбудители от сапрофитов.

Рис. 15. Анализ на сифилис — темнопольная микроскопия.

Рис. 16. При изучении сухих мазков используется окраска по Романовскому-Гимзе. Бледные трепонемы окрашиваются при этом в розовый цвет, все остальные виды спирохет — в фиолетовый.

Обнаружение бледных трепонем при микроскопии в темном поле — абсолютный критерий окончательной диагностики сифилиса.

Рис. 17. Для выявления бактерий применяется реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — трепонемный тест. Специфический комплекс антиген- антитело при соединении со специфической сывороткой, меченной флюорохромом, в свете люминесцентного микроскопа дает свечение бактерий зеленоватым цветом.

Рис. 18. Возбудители сифилиса хорошо просматриваются в мазках, приготовленных по методике Левадити (импрегнация серебром). Бледные трепонемы темного цвета на фоне желтой окраски клеток инфицированных тканей.

Рис. 20. На фото колонии бледных трепонем. Получить культуру бактерий тяжело. Они практически не растут на искусственных питательных средах. На средах, содержащих лошадиную и кроличью сыворотки, колонии появляются на 3 — 9 сутки.

ПЦР на сифилис

Эффективным и перспективным сегодня является методика проведения полимеразной цепной реакции. ПЦР на сифилис позволяет получить результат в течение нескольких часов, а в собранном для диагностики материале может присутствовать хотя бы несколько возбудителей заболевания.

Рис. 21. ПЦР на сифилис позволяет обнаружить ДНК или ее фрагменты бледных трепонем.

Чувствительность данного метода исследования зависит от наличия в биологическом материале бледных трепонем и достигает 98,6%. Специфичность данного теста во многом зависит от правильного выбора мишени для амплификации при проведении диагностики и достигает 100%.

Вместе с тем, в связи с недостаточно изученной сравнительной характеристики чувствительности и специфичности прямых методов диагностики сифилиса и ПЦР, данный метод обследования в РФ для диагностики заболевания пока не разрешен.

ПЦР на сифилис разрешено проводить лишь в некоторых случаях, как дополнительный метод диагностики врожденного сифилиса, нейросифилиса, при затруднениях проведения диагностики сифилиса с использованием серологических методов исследования у ВИЧ-больных.

Рис. 22. Выявление ДНК бледной трепонемы с применением ПЦР говорит либо о наличии жизнеспособных бактерий, либо об остатках погибших, но содержащих способных к образованию дополнительных копий отдельных участков хромосомной ДНК.

Что показывает серологический анализ крови? Диагностические мероприятия - это важнейший этап в терапии любого заболевания. Успех лечения зависит не только от назначенных препаратов, но и во многом от того, насколько правильно был поставлен диагноз.

Кроме того, диагностика позволяет предотвратить осложнения и сопутствующие заболевания. С помощью серологического анализа крови пациента выявляют наличие антител и антигенов. Исследование помогает найти множество заболеваний, определить их фазу и контролировать прохождение лечения.

Что такое серология?

Серологией называется отрасль иммунологии, изучающая реакции антигенов на антитела. Данный раздел медицины занимается изучением плазмы крови и ее иммунологических характеристик.

На сегодняшний день серологический анализ крови на антитела - это надежный способ выявления вируса иммунодефицита человека, гепатита, бруцеллеза, ЗППП и других опасных для жизни заболеваний. Разберемся, в каких случаях его назначают.

Показания к назначению

Серологический анализ крови необходим для выявления возбудителя болезни при затруднениях в постановке диагноза.

Для проведения этой реакции в плазму вводят антигены возбудителей, а затем протекающий процесс изучает лаборант. Либо осуществляют обратную реакцию: в инфицированную кровь вводят антитела для определения конкретной принадлежности возбудителя.

Сфера применения

Данное исследование используют в различных отраслях медицины. С помощью этой реакции выявляют специфические клетки и антитела, вырабатываемые организмом для того, чтобы бороться с инфекциями и вирусами.

Кроме этого, с помощью серологического метода определяется группа крови человека.

Подобное серологическое исследование анализа крови используют в гинекологии для диагностики болезней, передаваемых половым путем. Практикуется такой метод и для комплексных обследований беременных женщин (выявление токсоплазмоза, ВИЧ, сифилиса и т. д.). Прохождение этого теста является обязательным при постановке на учет в женской консультации.

У детей серологическая реакция используется для подтверждения диагноза так называемых «детских» заболеваний (ветрянки, кори, краснухи и т. д.) в том случае, если симптоматика не имеет выраженных проявлений и невозможно выявить болезнь, анализируя клинические показания.

Выявление венерических заболеваний

Для венерологов это тестирование поистине незаменимо и позволяет поставить диагноз очень точно.

При смазанной клинической картине серологический анализ крови на сифилис, лямблиоз, уреаплазмоз, хламидиоз, герпес и другие заболевания позволяет быстро выявить наличие антител.

Вирусные и инфекционные заболевания

Серологический анализ активно используется гастроэнтерологами, гепатологами и инфекционистами для диагностики вирусного гепатита.

Расшифровка серологического анализа крови дает возможность определить стадию протекания заболевания и ответить на вопрос, насколько необходима госпитализация в данный момент. Как правильно подготовиться?

Подготовка к сдаче анализа

Серологический анализ крови делают и в государственных, и в коммерческих клиниках. Предпочтение стоит отдать лаборатории, располагающей современным оборудованием и квалифицированным персоналом.

Биологическими образцами для исследования могут быть слюна и кал, но в большинстве случаев используется венозная кровь больного. Кровь для серологического теста берут из локтевой вены в условиях лаборатории. Перед тем как сдавать анализ, следует проконсультироваться с врачом по поводу подготовки к этой процедуре.

Для подготовки к сдаче анализа на серологическое исследование нужно соблюсти несколько несложных правил.

Кровь сдают в спокойном состоянии до приема пищи, то есть натощак. Перед этим не следует проходить другие исследования, например делать рентген, УЗИ и т. д.

Нужно исключить прием антибактериальных и некоторых других препаратов за несколько недель до сдачи крови. Определенные рекомендации в этом случае зависят от того заболевания, на которое делается тест. К примеру, исследование на гепатит предполагает исключение жирной пищи и алкоголя за 48 часов до процедуры.

Реакция флюоресценции

Среди разновидностей серологических реакций существует реакция флюоресценции. По этой методике используется реагент, подсвечивающий антитела в сыворотке крови.

Постановка серологической реакции прямого типа предполагает маркировку специфических антител флюоресцирующим веществом. Такая реакция является самой быстрой и проводится одноэтапно.

Другой вариант проведения такого анализа имеет название непрямого, или РНИФ. Проводится он в два этапа. На первом этапе антитела не маркируются флюоресцирующими метками, а на втором применяются соответственно отмеченные антитела для определения антигенов и антител. Свечение возникает только после того, как происходит связывание со специфическим антителом.

Что же показывает серологический анализ крови? Итог всей процедуры оценивает специальный прибор, который анализирует силу излучения, выявляет форму и размер исследуемого объекта. Возбудители инфекционных заболеваний выявляются с результатом, достоверность которого составляет 90-95 %, в зависимости от вида и стадии патологии.

Иммуноферментный анализ

В этих видах серологического исследования применяются уникальные стабильные реагенты. Отмеченные вещества как бы приклеиваются к искомым антителам. В итоге мы получаем качественный или количественный результат.

Если выраженных маркеров не обнаружилось, то результат будет считаться отрицательным. Если присутствие антител в биологических образцах при качественном исследовании обнаружено, то результат анализа считается положительным. При количественном определении клеток анализ дает более точный результат.

Анализируя показатели анализа (например, сумму выявленных клеток) специалист определяет, находится ли заболевание на начальном этапе, в острой стадии, или это обострилась хроническая форма патологии. Для того чтобы поставить диагноз, врач учитывает не только данные серологического исследования, но и клиническую картину заболевания.

Особенности данного теста

Проведение данного анализа не всегда способно дать 100%-ную уверенность в том, что определенное заболевание обнаружено. Бывает так, что результаты могут быть неоднозначными и требуется проведение других процедур.

Например, во время исследования на бруцеллез сыворотка крови проходит контроль на самозадержку без антигена. Это существенно повышает достоверность тестирования. Анализ на бруцеллез может иметь положительное или отрицательное значение, а также вызывать сомнения.

При получении сомнительных результатов, не имеющих однозначной трактовки, рекомендовано сдать анализ повторно. Кроме того, бруцеллез можно выявить в результате посевов крови, исследовав костный мозг и спинно-мозговую жидкость.

Плюсы серологического анализа крови

Диагностические методики с использованием серологических реакций обширно используются в современной медицинской практике. Особенно часто это делается при определении вирусных и инфекционных патологий.

Эти же анализы применяются при проведении географического скрининга и медицинского обследования с целью предупреждения эпидемиологического распространения инфекции.

К достоинствам метода можно отнести:

• Высокий уровень достоверности.
• Быстрое проведение реакции и получение результатов. Результаты РСК известны уже через 24 часа. При особой ситуации, в условиях стационара, анализ будет готов через несколько часов.
• Осуществление контроля развития болезни и эффективности проводимой терапии.
• Невысокая стоимость и доступность для пациентов.

Минусы метода

Однако серологические исследования имеют и свои недостатки.

К ним относится тот факт, что при проведении анализа следует учитывать инкубационный период заболевания, для того чтобы получить более достоверную картину.

К примеру, определение простого герпеса первого или второго типа возможно лишь спустя 14 дней с момента заражения. Анализ на наличие вируса иммунодефицита проводят через 30 дней, через 90 дней и спустя полгода после контакта с инфицированным человеком.

Безусловно, на достоверность результатов может оказывать влияние и человеческий фактор: пренебрежение правилами подготовки к забору крови или ошибка, допущенная лаборантом при проведении реакции.

По статистике, ошибочный результат может быть получен в 5 % случаев. Опытный врач при обследовании пациента, изучив клиническую картину, в большинстве случаев может вычислить допущенную ошибку.