INDIREKTE HÄMAGGLUTINATIONSREAKTION, RNGA
(Indirekter Hämagglutinationstest)

Eine Methode zum Nachweis von Antigenen und Antikörpern, die auf der Fähigkeit roter Blutkörperchen basiert, auf deren Oberfläche Antigene oder Antikörper voradsorbiert sind, in Gegenwart homologer Seren oder entsprechender Antigene zu agglutinieren.

Bei Nachweis von Antigenen wird die Reaktion durch einen umgekehrten passiven Hämagglutinationstest angezeigt, bei Nachweis von Antikörpern durch einen passiven Hämagglutinationstest. RNGA gefunden breite Anwendung zur Identifizierung serologischer Marker einer Hepatitis-B-Virusinfektion, insbesondere HBsAg und Antikörper dagegen.

Derzeit entwickelt verschiedene Methoden Herstellung von Erythrozytendiagnostika, die sich in den Methoden der Sensibilisierung der Erythrozyten (mit Tannin, Glutaraldehyd, Chromchlorid, Rivanol usw.), ihrer Spezies (Mensch, Schaf, Huhn, Truthahn usw.) und den Optionen für die Durchführung der Reaktion (in Mikrotiter) unterscheiden Platten, Reagenzgläser, Kapillaren usw.) und Aufzeichnung der Ergebnisse (visuell und instrumentell). Erythrozyten-Diagnosekits zum Nachweis von HBsAg und Anti-HBs werden von vielen Unternehmen und Firmen im In- und Ausland hergestellt.

Häufiger wird die RNGA in Mikrotiterplatten durchgeführt, in denen Verdünnungen des Testserums und der Kontrollproben vorgefertigt werden. Nach Zugabe des Erythrozytendiagnostikums und Inkubation werden die Ergebnisse der Reaktion protokolliert. Proben, bei denen eine Agglutination der roten Blutkörperchen auftritt, die wie ein umgekehrter „Regenschirm“ aussieht, gelten als positiv. Bei negative Reaktion- Rote Blutkörperchen setzen sich ring- oder scheibenförmig am Boden des Lochs ab.

Um die Spezifität der erhaltenen Ergebnisse zu bestätigen, wird die Reaktion sowohl mit einem „experimentellen“ Erythrozytendiagnostikum (d. h. Erythrozyten, die mit Antigen oder Antikörpern sensibilisiert sind) als auch mit einem „Kontroll“-Diagnostikum (d. h. Erythrozyten, die nicht mit Antigen oder Antikörpern sensibilisiert sind) durchgeführt. Das Vorliegen einer positiven Reaktion mit einem „Kontroll“-Diagnostikum weist auf eine falsch positive Reaktion hin. Um unspezifische Reaktionen auszuschließen, wird das Testserum mit nicht sensibilisierten Erythrozyten behandelt. Voraussetzung für die Durchführung von RNGA ist eine Neutralisationsreaktion, also ein Bestätigungstest.

Im Vergleich zu Methoden wie RPG, VIEF und RSK ist die Reaktion indirekte Hämagglutination hat eine höhere Empfindlichkeit (200- bis 400-fach). Somit kann HBsAg in RPGA in Konzentrationen von 6–10 ng/ml nachgewiesen werden. Die Einfachheit der Reaktion und die Schnelligkeit (20–30 Minuten) haben zu ihrer weiten Verbreitung geführt diese Methode im Blutspendedienst zum Nachweis von HBsAg.

Neben der Erythrozytendiagnostik zum Nachweis von HBsAg und Anti-HBs wurden diagnostische Präparate zum Nachweis von Anti-HBc, Anti-HBc-Klasse-IgM (Festphasenversion), HBeAg, Hepatitis-A-Virus-Antigen und Antikörpern dagegen entwickelt Sie alle haben jedoch keine Anwendung in der praktischen Gesundheitsversorgung gefunden.

Labordiagnostik von fast allen Infektionskrankheiten basiert auf der Identifizierung von Antikörpern im Blut des Patienten, die gegen Erregerantigene gebildet werden, mittels serologischer Reaktionen. Sie traten vom späten 19. bis zum frühen 20. Jahrhundert in die medizinische Praxis ein.

Die Entwicklung der Wissenschaft hat dazu beigetragen, die Antigenstruktur von Mikroben zu bestimmen chemische Formeln ihre Giftstoffe. Dadurch war es möglich, nicht nur therapeutische, sondern auch diagnostische Seren herzustellen. Sie werden durch die Injektion abgeschwächter Krankheitserreger in Versuchstiere gewonnen. Nach mehrtägiger Inkubation werden aus dem Blut von Kaninchen oder Mäusen Präparate hergestellt, mit denen mittels serologischer Tests Mikroben oder deren Toxine identifiziert werden.

Die äußere Manifestation einer solchen Reaktion hängt von den Bedingungen ihrer Entstehung und vom Zustand der Antigene im Blut des Patienten ab. Wenn mikrobielle Partikel unlöslich sind, fallen sie im Serum aus, lysieren, binden oder immobilisieren sich. Wenn Antigene löslich sind, kommt es zum Phänomen der Neutralisation oder Ausfällung.

Agglutinationsreaktion (RA)

Die serologische Agglutinationsreaktion ist hochspezifisch. Es ist einfach durchzuführen und visuell genug, um schnell das Vorhandensein von Antigenen im Blutserum des Patienten festzustellen. Es wird zur Durchführung der Widal-Reaktion (Diagnose) verwendet Typhus und Paratyphus) und Weigl (Typhus).

Es basiert auf der spezifischen Interaktion zwischen menschlichen Antikörpern (oder Agglutininen) und mikrobiellen Zellen (Agglutenogenen). Nach ihrer Wechselwirkung entstehen Partikel, die ausfallen. Das ist ein positives Zeichen. Zur Durchführung der Reaktion können lebende oder abgetötete mikrobielle Wirkstoffe, Pilze, Protozoen und somatische Zellen verwendet werden.

Chemisch gliedert sich die Reaktion in zwei Stufen:

1. Spezifische Kombination von Antikörpern (AT) mit Antigenen (AG).
2. Unspezifisch - Ausfällung von AG-AT-Konglomeraten, also Bildung eines Agglutinats.

Indirekte Agglutinationsreaktion (IAR)

Zur Durchführung werden gereinigte Schaf-Erythrozyten und menschliche rote Blutkörperchen verwendet, die mit Antikörpern oder Antigenen vorbehandelt sind (dies hängt davon ab, was der Labortechniker genau finden möchte). In einigen Fällen werden menschliche rote Blutkörperchen mit Immunglobulinen behandelt. Serologische Reaktionen von Erythrozyten gelten als erfolgreich, wenn sie sich am Boden des Röhrchens absetzen. Von einer positiven Reaktion kann man sprechen, wenn die Zellen in Form eines umgekehrten Regenschirms angeordnet sind und den gesamten Boden einnehmen. Eine negative Reaktion wird gezählt, wenn sich die roten Blutkörperchen in einer Säule oder in Form eines Knopfes in der Mitte des Bodens absetzen.

Fällungsreaktion (RP)

Serologische Tests dieser Art dienen dem Nachweis kleinster Antigenpartikel. Dies können beispielsweise Proteine ​​(oder Teile davon), Verbindungen von Proteinen mit Lipiden oder Kohlenhydraten, Teile von Bakterien und deren Toxine sein.

Seren für die Reaktion werden durch künstliche Infektion von Tieren, meist Kaninchen, gewonnen. Mit dieser Methode können Sie absolut jedes präzipitierende Serum erhalten. Die Entstehung serologischer Präzipitationsreaktionen ähnelt im Wirkmechanismus den Agglutinationsreaktionen. Im Serum enthaltene Antikörper verbinden sich mit Antigenen und bilden große Proteinmoleküle, die sich am Boden des Röhrchens oder auf dem Substrat (Gel) ablagern. Diese Methode gilt als hochspezifisch und kann selbst kleinste Mengen einer Substanz nachweisen.

Zur Diagnose von Pest, Tularämie, Milzbrand, Meningitis und anderen Krankheiten. Darüber hinaus ist er an der gerichtsmedizinischen Untersuchung beteiligt.

in Gel

Serologische Reaktionen können nicht nur in einem flüssigen Medium, sondern auch in einem Agar-Gel durchgeführt werden. Dies wird als diffuse Niederschlagsmethode bezeichnet. Mit seiner Hilfe wird die Zusammensetzung komplexer Antigengemische untersucht. Diese Methode basiert auf der Chemotaxis von Antigenen zu Antikörpern und umgekehrt. Im Gel bewegen sie sich unterschiedlich schnell aufeinander zu und bilden beim Zusammentreffen Niederschlagslinien. Jede Zeile ist ein Satz AG-AT.

Exotoxin-Neutralisierungsreaktion mit Antitoxin (RN)

Antitoxische Seren sind in der Lage, die Wirkung von Exotoxinen zu neutralisieren, die von Mikroorganismen produziert werden. Darauf basieren diese serologischen Reaktionen. Die Mikrobiologie nutzt diese Methode zur Titration von Seren, Toxinen und Toxoiden sowie zur Bestimmung ihrer therapeutischen Wirksamkeit. Die Stärke der Toxinneutralisierung wird durch konventionelle Einheiten – AE – bestimmt.

Darüber hinaus ist es dank dieser Reaktion möglich, die Spezies oder den Typ des Exotoxins zu bestimmen. Dies wird bei Diphtherie und Botulismus eingesetzt. Die Studie kann sowohl „auf Glas“ als auch in Gel durchgeführt werden.

Lysereaktion (RL)

Das in den Körper des Patienten gelangende Immunserum hat neben seiner Hauptfunktion der passiven Immunität auch lysierende Eigenschaften. Es ist in der Lage, mikrobielle Wirkstoffe, fremde Zellelemente und Viren, die in den Körper des Patienten gelangen, aufzulösen. Abhängig von der Spezifität der im Serum enthaltenen Antikörper werden Bakteriolysine, Cytolysine, Spirochetolysine, Hämolysine und andere isoliert.

Diese spezifischen Antikörper werden „Komplement“ genannt. Es kommt in fast allen Flüssigkeiten des menschlichen Körpers vor, verfügt über eine komplexe Proteinstruktur und ist äußerst empfindlich gegenüber erhöhter Temperatur, Erschütterungen, Säuren und direkten Einflüssen Sonnenstrahlen. Aber wenn es getrocknet ist, kann es seine lysierenden Eigenschaften bis zu sechs Monate lang behalten.

Es gibt folgende Arten serologischer Reaktionen dieser Art:

Bakteriolyse;

Hämolyse.

Die Bakteriolyse wird mit dem Blutserum des Patienten und spezifischem Immunserum mit lebenden Mikroben durchgeführt. Wenn eine ausreichende Menge an Komplement im Blut vorhanden ist, kann der Forscher eine Lyse der Bakterien beobachten und die Reaktion wird als positiv gewertet.

Die zweite serologische Blutreaktion besteht darin, dass eine Suspension der roten Blutkörperchen des Patienten mit Serum behandelt wird, das Hämolysine enthält, die nur bei Vorhandensein eines bestimmten Komplements aktiviert werden. Ist ein solcher vorhanden, beobachtet der Laborassistent die Auflösung der roten Blutkörperchen. Diese Reaktion wird häufig verwendet moderne Medizin Bestimmung des Komplementtiters (d. h. der kleinsten Menge, die die Lyse der roten Blutkörperchen hervorruft) im Blutserum und Durchführung eines Komplementfixierungstests. Auf diese Weise wird eine serologische Reaktion auf Syphilis durchgeführt -

Komplementfixierungsreaktion (CFR)

Diese Reaktion wird verwendet, um Antikörper gegen einen Infektionserreger im Blutserum des Patienten nachzuweisen und den Erreger anhand seiner Antigenstruktur zu identifizieren.

Bisher haben wir einfache serologische Reaktionen beschrieben. RSC gilt als komplexe Reaktion, da dabei nicht zwei, sondern drei Elemente interagieren: Antikörper, Antigen und Komplement. Sein Wesen liegt darin, dass die Wechselwirkung zwischen Antikörper und Antigen nur in Gegenwart von Komplementproteinen stattfindet, die an der Oberfläche des resultierenden AG-AT-Komplexes adsorbiert werden.

Die Antigene selbst unterliegen nach der Zugabe von Komplement erheblichen Veränderungen, die auf die Qualität der durchgeführten Reaktion hinweisen. Dies kann eine Lyse, Hämolyse, Immobilisierung, bakterizide oder bakteriostatische Wirkung sein.

Die Reaktion selbst verläuft in zwei Phasen:

1. Bildung eines Antigen-Antikörper-Komplexes, der für den Forscher optisch nicht wahrnehmbar ist.
2. Veränderung des Antigens unter dem Einfluss von Komplement. Diese Phase kann am häufigsten mit bloßem Auge beobachtet werden. Ist die Reaktion optisch nicht sichtbar, wird ein zusätzliches Indikatorsystem zur Erkennung von Veränderungen eingesetzt.

Indikatorensystem

Diese Reaktion basiert auf der Komplementfixierung. Gereinigte Schaferythrozyten und hämolytisches Serum, das kein Komplement enthält, werden eine Stunde nach der Platzierung des RSC in das Reagenzglas gegeben. Wenn ungebundenes Komplement im Reagenzglas zurückbleibt, verbindet es sich mit dem AG-AT-Komplex, der zwischen Schafsblutzellen und Hämolysin gebildet wird, und löst dessen Auflösung aus. Dies bedeutet, dass der RSC negativ ist. Bleiben die roten Blutkörperchen intakt, ist die Reaktion positiv.

Hämagglutinationsreaktion (HRA)

Es gibt zwei grundsätzlich unterschiedliche Hämagglutinationsreaktionen. Eine davon ist serologischer Natur und dient der Bestimmung von Blutgruppen. In diesem Fall interagieren rote Blutkörperchen mit Antikörpern.

Und die zweite Reaktion ist nicht serologisch, da rote Blutkörperchen mit von Viren produzierten Hämagglutininen reagieren. Da jeder Erreger nur auf bestimmte rote Blutkörperchen (Huhn, Lamm, Affe) einwirkt, kann diese Reaktion als hochspezifisch angesehen werden.

Ob eine Reaktion positiv oder negativ ist, erkennen Sie an der Lage der Blutkörperchen am Boden des Reagenzglases. Wenn ihr Muster einem umgekehrten Regenschirm ähnelt, bedeutet dies, dass das gewünschte Virus im Blut des Patienten vorhanden ist. Und wenn alle roten Blutkörperchen wie eine Münzsäule geformt sind, dann sind die gewünschten Krankheitserreger nicht vorhanden.

Hämagglutinationshemmungsreaktion (HAI)

Hierbei handelt es sich um eine hochspezifische Reaktion, mit der Sie die Art, die Art der Viren oder das Vorhandensein spezifischer Antikörper im Blutserum des Patienten bestimmen können.

Sein Wesen liegt darin, dass Antikörper, die mit dem Testmaterial in ein Reagenzglas gegeben werden, die Ablagerung von Antigenen auf roten Blutkörperchen verhindern und dadurch die Hämagglutination stoppen. Dies ist ein qualitatives Zeichen für die Anwesenheit im Blut spezifische Antigene zu dem spezifischen Virus, nach dem Sie suchen.

Immunfluoreszenzreaktion (RIF)

Die Reaktion basiert auf der Fähigkeit, AG-AT-Komplexe nach der Behandlung mit Fluorochrom-Farbstoffen nachzuweisen. Diese Methode ist einfach anzuwenden, erfordert keine Isolierung der Reinkultur und nimmt wenig Zeit in Anspruch. Es ist für die schnelle Diagnose von Infektionskrankheiten unverzichtbar.

In der Praxis werden diese serologischen Reaktionen in zwei Typen unterteilt: direkte und indirekte.

Direktes RIF wird mit einem Antigen hergestellt, das mit fluoreszierendem Serum vorbehandelt wurde. Und die indirekte besteht darin, dass das Medikament zunächst mit einem herkömmlichen Diagnostikum behandelt wird, das Antigene gegen die gewünschten Antikörper enthält, und dann erneut ein Lumineszenzserum aufgetragen wird, das spezifisch für die Proteine ​​des AG-AT-Komplexes ist, und unter dem sich mikrobielle Zellen bemerkbar machen Mikroskopie.

Passive Hämagglutinationsreaktion)

Ein Verfahren zum Nachweis und zur Identifizierung von Antigenen oder Antikörpern, das auf dem Phänomen der Agglutination roter Blutkörperchen basiert, die in deren Gegenwart auftreten und auf deren Oberfläche die entsprechenden spezifischen Antigene zuvor adsorbiert wurden.

1. Kleine medizinische Enzyklopädie. - M.: Medizinische Enzyklopädie. 1991-96 2. Erstens medizinische Versorgung. - M.: Große russische Enzyklopädie. 1994 3. Enzyklopädisches Wörterbuch medizinische Begriffe. - M.: Sowjetische Enzyklopädie. - 1982-1984.

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indirekte Hämagglutinationsreaktion- RNGA-Labortest mit Erythrozytendiagnostika. [Englisch-Russisches Glossar grundlegender Begriffe der Vakzinologie und Immunisierung. Weltorganisation Gesundheitswesen, 2009] Themen Vakzinologie, Immunisierung Synonyme RNGA EN... ... Leitfaden für technische Übersetzer

- (RNHA; Synonym für passive Hämagglutinationsreaktion) eine Methode zum Nachweis und zur Identifizierung von Antigenen oder Antikörpern, die auf dem Phänomen der Agglutination roter Blutkörperchen basiert, die in deren Gegenwart auftritt, an deren Oberfläche sie zuvor adsorbiert wurden... ... Großes medizinisches Wörterbuch

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Agglutinationsreaktionen basieren auf der Wechselwirkung eines Reagenzes (Antikörper) mit Antigenen, die sich auf der Oberfläche von Zellen befinden oder Fremdpartikel. Dadurch bilden sich große Aggregate, die ausfallen und bereits mit bloßem Auge erkennbar sind. Auf diese Weise wird die Blutgruppe anhand des ABO-Systems, des Vorhandenseins des Rh-Faktors usw. bestimmt. Dies ist eine empfindlichere Diagnosemethode im Vergleich zu Fällungsreaktionen, da das Sedimentvolumen (Agglutinat) das Volumen von übersteigt Präzipitat.

Direkte Hämagglutination

Die direkte Hämagglutinationsreaktion (DHR) dient dem Nachweis von Oberflächenantigenen von Mikroorganismen und roten Blutkörperchen sowie von Antikörpern dagegen.
Das Testmaterial (Blut) wird zu Standardseren hinzugefügt, die Antikörper enthalten. Die Geschwindigkeit der direkten Agglutinationsreaktion hängt von der Menge des zu testenden Materials, der Menge und Konzentration des Serums sowie der Umgebungstemperatur ab.

Indirekte Hämagglutination

Die indirekte Hämagglutinationsreaktion wird durchgeführt, um mithilfe eines Erythrozyten-Diagnosekits Antikörper im Blut des Patienten nachzuweisen. Das Reagenz besteht aus roten Blutkörperchen, auf deren Oberfläche sich ein Antigen (Proteine ​​von Mikroorganismen, Toxine, Allergene usw.) befindet.
Das Blutserum des Patienten wird mit 0,9 %iger Natriumchloridlösung verdünnt, anschließend wird Erythrozytendiagnostum zugegeben und das Ergebnis kontrolliert. Diese hochempfindliche Diagnosemethode weist Antigene bereits in geringen Konzentrationen nach.

Hämagglutinationsreaktion (HRA).

Im Labor kommen zwei Hämagglutinationsreaktionen mit unterschiedlichen Wirkmechanismen zum Einsatz.

Die erste RGA ist serologisch. Bei dieser Reaktion verklumpen rote Blutkörperchen, wenn sie mit entsprechenden Antikörpern (Hämagglutininen) interagieren. Die Reaktion wird häufig zur Bestimmung von Blutgruppen verwendet.

Die zweite RGA ist nicht serologisch. Dabei kommt es nicht zur Adhäsion roter Blutkörperchen

Antikörper, sondern spezielle, von Viren gebildete Stoffe. Beispielsweise verklumpt das Influenzavirus die roten Blutkörperchen von Hühnern und Meerschweinchen, Poliovirus – rote Blutkörperchen von Schafen. Diese Reaktion ermöglicht es uns, das Vorhandensein eines bestimmten Virus im untersuchten Material zu beurteilen.

Die Reaktion wird in Reagenzgläsern oder auf speziellen Platten mit Vertiefungen durchgeführt. Das auf das Vorhandensein des Virus getestete Material wird mit einer isotonischen Lösung von 1:10 bis 1:1280 verdünnt; 0,5 ml jeder Verdünnung werden mit einem gleichen Volumen einer 1–2 %igen Erythrozytensuspension gemischt. Bei der Kontrolle werden 0,5 ml Erythrozyten mit 0,5 ml isotonischer Lösung vermischt. Die Reagenzgläser werden 30 Minuten lang in einen Thermostat gestellt und die Platten 45 Minuten lang bei Raumtemperatur belassen.

Bilanzierung von Ergebnissen. Bei positives Ergebnis Bei dieser Reaktion bildet sich am Boden des Reagenzglases oder der Vertiefung ein Sediment roter Blutkörperchen mit gewellten Rändern („Regenschirm“), das den gesamten Boden der Vertiefung bedeckt. Bei einem negativen Ergebnis bilden die roten Blutkörperchen ein dichtes Sediment mit glatten Rändern („Knopf“). In der Kontrolle sollte sich das gleiche Sediment befinden. Die Intensität der Reaktion wird durch „+“-Zeichen ausgedrückt.

Hämagglutinationsreaktion

Der Virustiter ist die maximale Verdünnung des Materials, in dem eine Agglutination auftritt.

Hämagglutinationshemmungsreaktion

Hierbei handelt es sich um eine serologische Reaktion, bei der spezifische antivirale Antikörper, die mit dem Virus (Antigen) interagieren, dieses neutralisieren und ihm die Fähigkeit nehmen, rote Blutkörperchen zu agglutinieren, d. h. die Hämagglutinationsreaktion zu hemmen. Mit dieser Reaktion können Sie die Art und Art der Viren bestimmen.

Eine Reaktion einrichten. 0,25 ml antivirales Serum werden mit einem gleichen Volumen virushaltigem Material gemischt. Die Mischung wird geschüttelt und 30 Minuten lang in einen Thermostat gestellt. Anschließend werden 0,5 ml einer 1–2 %igen Erythrozytensuspension zugegeben.

Bilanzierung von Ergebnissen. Bei richtige Positionierung Erfahrung in der Überwachung von Serum und Erythrozyten, es sollte sich ein „Knopf“ bilden – es gibt keinen Erythrozyten-Agglutinationsfaktor; Bei der Antigenkontrolle wird ein „Schirm“ gebildet – das Virus verursacht eine Agglutination der roten Blutkörperchen. Wenn das Serum mit dem untersuchten Virus homolog ist, entsteht ein „Knopf“ – das Serum hat das Virus neutralisiert.

Indirekte Hämagglutinationsreaktion

Die indirekte (passive) Hämagglutinationsreaktion (RIHA) basiert auf der Tatsache, dass rote Blutkörperchen, wenn ein lösliches Antigen an ihrer Oberfläche adsorbiert wird, durch die Interaktion mit Antikörpern gegen das adsorbierte Antigen die Fähigkeit zur Agglutination erlangen.

Eine Reaktion einrichten. Das Serum wird 30 Minuten lang auf 56 °C erhitzt, nacheinander im Verhältnis 1:10 - 1:1280 verdünnt und in 0,25 ml in Reagenzgläser oder Vertiefungen gegossen, wo dann 2 Tropfen rote Blutkörperchen mit daran adsorbierten Antigenen zugegeben werden hinzugefügt.

Kontrollen: eine Suspension von Erythrozyten mit daran adsorbierten Antigenen mit offensichtlichem Immunserum, eine Suspension von Erythrozyten mit daran adsorbierten Antigenen mit normalem Serum; Suspension normale rote Blutkörperchen mit dem Testserum. Bei der ersten Kontrolle sollte es zu einer Agglutination kommen, bei der zweiten und dritten Kontrolle sollte es nicht vorkommen.

Testfragen.

1. Was bedeutet ein positives Röntgenanalyseergebnis zwischen roten Blutkörperchen und dem Material, das auf das Vorhandensein des Virus getestet wird?

2. Kommt es zu einer Agglutinationsreaktion der roten Blutkörperchen, wenn ihnen ein Virus und das entsprechende Serum zugesetzt werden? Wie heißt die Reaktion, die dieses Phänomen offenbart?

PRAKTISCHE ARBEIT Nr. 12.

Komplementfixierungsreaktion.

Die Komplementfixierungsreaktion (CFR) basiert auf der Tatsache, dass ein spezifischer Antigen-Antikörper-Komplex immer Komplement an sich selbst adsorbiert (bindet).

Diese Reaktion wird häufig zur Identifizierung von Antigenen und zur Serodiagnose von Infektionen eingesetzt, insbesondere von Krankheiten, die durch Spirochäten (Wassermann-Reaktion), Rickettsien und Viren verursacht werden.

RKS ist eine komplexe serologische Reaktion. Es handelt sich um Komplement und zwei Antigen-Antikörper-Systeme. Im Wesentlichen handelt es sich hierbei um zwei serologische Reaktionen.

Das rechte Hauptsystem besteht aus einem Antigen und einem Antikörper (einer ist bekannt, der andere nicht). Es wird eine gewisse Menge Komplement hinzugefügt. Wenn Antigen und Antikörper dieses Systems übereinstimmen, verbinden sie sich und binden ein Komplement. Der resultierende Komplex ist fein verteilt und nicht sichtbar.

Die Bildung dieses Komplexes wird über ein zweites Hämolyse- oder Indikatorsystem nachgewiesen. Es umfasst rote Blutkörperchen (Antigen) vom Schaf und das entsprechende hämolytische Serum (Antikörper), d. h. fertiger Immunkomplex. In diesem System kann die Lyse roter Blutkörperchen nur in Gegenwart von Komplement erfolgen. Wenn das Komplement vom ersten System gebunden wird, findet im zweiten System keine Hämolyse statt, weil keine kostenlose Ergänzung. Das Ausbleiben einer Hämolyse (der Inhalt des Röhrchens ist trüb oder am Boden befindet sich ein Sediment aus Erythrozyten) wird als positives RSC-Ergebnis erfasst.

Wenn im ersten System das Antigen nicht dem Antikörper entspricht, wird der Immunkomplex nicht gebildet und das Komplement bleibt frei. Da das Kompliment frei bleibt, nimmt es am zweiten System teil und verursacht eine Hämolyse. Das RSC-Ergebnis ist negativ (der Inhalt der Röhrchen ist transparent – ​​„lackiertes Blut“).

Komponenten, Komplementfixierungsreaktionen:

1. Antigen – normalerweise Lysat, Extrakt, Hapten,

seltener eine Suspension von Mikroorganismen.

2. Antikörper – Serum des Patienten.

3. Komplement – ​​Meerschweinchenserum.

4. Antigen – Schaf-Erythrozyten.

5. Antikörper – Hämolysin gegen Schaf-Erythrozyten.

6. Isotonische Lösung.

Aufgrund der Tatsache, dass die RSK teilnimmt große Zahl komplexe Bauteile,

Sie müssen zunächst in exakten Mengen und in genauen Mengen titriert und umgesetzt werden gleiche Volumina: 0,5 oder 0,25, seltener 0,2, 1,25 oder 1,0 ml (größere Volumina ergeben ein genaueres Ergebnis). Die Titration der Reaktionskomponenten erfolgt im gleichen Volumen wie das Experiment, wobei die fehlenden Bestandteile durch eine isotonische Lösung ersetzt werden.

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Der indirekte oder passive Hämagglutinationstest (IRHA oder RPHA) ist empfindlicher und spezifischer als der Agglutinationstest. Diese Reaktion wird auch in zwei Richtungen genutzt.

1) Zum Nachweis von Antikörpern im Blutserum des Patienten wird die Erythrozytendiagnostik eingesetzt, bei der das Antigen an der Oberfläche von mit Tannin behandelten Erythrozyten adsorbiert wird. Im Zusammenhang mit dieser Reaktion wird häufiger der Begriff RPGA verwendet.

Das Testserum wird in den Vertiefungen von Kunststoffplatten verdünnt und mit Erythrozytendiagnostik versetzt. Bei einer positiven Reaktion bildet sich entlang der Lochwände ein dünner Film in Form eines „Spitzenschirms“, bei einer negativen Reaktion entsteht ein dichter Erythrozytensediment in Form eines „Knopfes“.

2) Zum Nachweis von Toxinen und bakteriellen Antigenen im Untersuchungsmaterial werden Antikörper-Erythrozyten-Diagnoseflüssigkeiten verwendet, die durch Adsorption von Antikörpern an Erythrozyten gewonnen werden. Im Zusammenhang mit dieser Reaktion wird häufiger der Begriff RNGA verwendet. Mit Hilfe der Antikörperdiagnostik werden beispielsweise Pestbazillus-Antigen, Diphtherie-Exotoxin und Botulinum-Exotoxin nachgewiesen.

Was ist ein Erythrozytendiagnostum? Was ist ein Antikörper-Erythrozyten-Diagnostikum?

Erythrozytendiagnostika sind rote Blutkörperchen (behandelt mit Tannin oder Formalin), auf denen aus Bakterien extrahierte Antigene adsorbiert sind, und werden bei RPHA (passive Hämagglutinationsreaktionen) verwendet. Wenn RPHA zum Nachweis von Antigenen in den Sekreten von Patienten, in Geweben usw. verwendet wird, werden „Antikörperdiagnostika“ verwendet, d. h. mit Antikörpern sensibilisierte rote Blutkörperchen.

Beim RNGA werden Blutserumantikörper mithilfe eines antigenen Erythrozytendiagnostums nachgewiesen, bei dem es sich um Erythrozyten mit daran adsorbierten Antigenen handelt.

Methodik zum Einrichten von Reaktionen. Koagglutinationsreaktion.

- Fixierung roter Blutkörperchen mit Formaldehyd oder Glutar- oder Acrylaldehyden. Solche behandelten roten Blutkörperchen werden lange gelagert. Häufiger werden hierfür Erythrozyten von Schafen, Menschen, Hühnern etc. verwendet;
— Behandlung fixierter Erythrozyten mit einer Tanninlösung. Dadurch erlangen rote Blutkörperchen die Fähigkeit, Proteine ​​(Viren und Antikörper) irreversibel an ihrer Oberfläche zu adsorbieren;
- Sensibilisierung tanisierter Erythrozyten durch Viren oder Antikörper.

Koagglutinationsreaktion (PCA)

Die Koagglutinationsreaktion dient der Bestimmung von Antigenen mithilfe von an Protein A von Staphylokokkenzellen adsorbierten Antikörpern (Antikörperdiagnostik).
Protein A hat eine Affinität zum Fc-Fragment von Immunglobulinen, daher adsorbieren solche mit immundiagnostischem Serum behandelten Bakterien unspezifisch Serumantikörper, die dann mit aktiven Zentren mit den entsprechenden aus Patienten isolierten Mikroben interagieren. Durch die Koagglutination entstehen Flocken bestehend aus Staphylokokken, diagnostischen Serumantikörpern und dem nachgewiesenen Mikroorganismus.

Agglutinierende Seren: was sie enthalten; wie sie gewonnen werden, wofür sie verwendet werden; Wie hoch ist der Titer des agglutinierenden Serums?

Agglutinierendes Serum wird durch Immunisierung von Kaninchen (intravenös, subkutan oder intraperitoneal) mit einer Suspension abgetöteter Bakterien gewonnen, beginnend mit einer Dosis von 200 Millionen, dann 500 Millionen, 1 Milliarde, 2 Milliarden Mikrobenkörpern in 1 ml, in Abständen von 5 Tagen. 7-8 Tage nach der letzten Immunisierung wird Blut abgenommen und der Antikörpertiter bestimmt.

Der Titer eines agglutinierenden Serums ist die maximale Verdünnung des Serums, bei der eine Agglutination mit dem entsprechenden Mikroorganismus auftritt.

Agglutinierende Seren werden zur Identifizierung von Mikroben in einer umfassenden Agglutinationsreaktion verwendet.

Hämagglutinationsreaktion (HRA)

Wenn der untersuchte Mikroorganismus durch Serum bis zum Titer oder bis zum halben Titerwert agglutiniert, kann davon ausgegangen werden, dass er zu der Art gehört, deren Name auf dem Ampullenetikett angegeben ist.

Was sind die Unterschiede zwischen polyvalenten und monovalenten (Monorezeptor) agglutinierenden Seren? Warum wird bei der Immunisierung eines Kaninchens mit Mikroben einer Art ein Serum erhalten, das Antikörper gegen mehrere Antigene enthält?

Monorezeptor-Seren sind Seren, die Antikörper gegen nur ein Antigen enthalten, und polyvalente Seren, die Agglutinationsreaktionen mit zwei oder drei verwandten Bakterien hervorrufen, die ein gemeinsames Antigen haben. Agglutinierende Seren werden zur Identifizierung von Mikroorganismen in einer Agglutinationsreaktion verwendet. Der Nachteil solcher Seren besteht darin, dass sie Gruppenagglutinationsreaktionen hervorrufen können, weil Sie enthalten Antikörper gegen Bakterien, die gemeinsame Antigene haben.

Hämagglutinationsreaktion. Beschreibung und Anwendung

Es basiert auf der Tatsache, dass rote Blutkörperchen, an denen zuvor Antigene adsorbiert wurden, in Gegenwart homologer Seren (Antikörper) die Fähigkeit zur Agglutination erlangen.

In diesem Fall fungieren rote Blutkörperchen als Träger spezifischer Determinanten, deren Agglutination infolge der Antigen-Antikörper-Reaktion erfolgt.

Rote Blutkörperchen, an deren Oberfläche Antigene fest haften, werden Erythrozyten-Antigen-Diagnostika oder mit Antigenen sensibilisierte Erythrozyten genannt.

Eine andere Art von RNGA – Antikörper werden an der Oberfläche von Erythrozyten adsorbiert und ihre anschließende Agglutination erfolgt in Gegenwart eines homologen Antigens. In diesem Fall werden solche Erythrozyten Erythrozyten-Antikörper-Diagnostika oder durch Antikörper sensibilisierte Erythrozyten genannt.

Basierend auf diesen beiden grundlegenden methodischen Ansätzen wurden viele Modifikationen des RNGA entwickelt und verwendet. Daher werden als Träger kleine Standardlatexpartikel verwendet. In diesem Fall wird die Reaktion als Latex-Agglutinationsreaktion (RLA) bezeichnet oder eingesetzt Staphylococcus aureus- Koagglutinationsreaktion usw. Normalerweise werden Erythrozytendiagnostika in Unternehmen der biologischen Industrie hergestellt, und die Haupterfahrung von RNGA wird in diagnostischen Labors durchgeführt.

Die Erstellung eines Erythrozyten-Diagnostikums umfasst folgende Schritte:

• Fixierung roter Blutkörperchen mit Formaldehyd oder Glutar- oder Acrylaldehyden. Solche behandelten roten Blutkörperchen werden lange gelagert. Häufiger werden hierfür Erythrozyten von Schafen, Menschen, Hühnern etc. verwendet;
• Behandlung fixierter Erythrozyten mit Tanninlösung. Dadurch erlangen rote Blutkörperchen die Fähigkeit, Proteine ​​(Viren und Antikörper) irreversibel an ihrer Oberfläche zu adsorbieren;
• Sensibilisierung tanisierter Erythrozyten durch Viren oder Antikörper.

Es ist zu beachten, dass die Methoden zur Vorbereitung der Erythrozytendiagnostik für Virusinfektionen anders.

Das Verfahren zur Durchführung von RNGA zum Nachweis und zur Bestimmung des Antikörpertiters ist wie folgt:

• Gleiche Dosen von mit Antigen sensibilisierten Erythrozyten werden zu aufeinanderfolgenden zweifachen Serumverdünnungen gegeben.
• die Mischung wird 2–3 Stunden bei Raumtemperatur oder 16–18 Stunden bei 4 °C stehen gelassen;
• Berücksichtigen Sie die Ergebnisse. Enthält das Serum Antikörper gegen das Virus, mit dem die roten Blutkörperchen sensibilisiert wurden, wird eine Hämagglutination beobachtet, die in Kreuzen beurteilt wird.

Als Antikörpertiter im Serum gilt die höchste Serumverdünnung, die noch eine Hämagglutination von mindestens zwei Kreuzen bewirkt.

RNGA wird von allen relevanten Kontrollen begleitet. Normalerweise wird die Reaktion nach der Mikromethode durchgeführt.

Mit RNGA können Sie die folgenden Diagnoseprobleme lösen:

• Nachweis von Antikörpern und Bestimmung ihres Titers im Blutserum unter Verwendung eines bekannten Erythrozyten-Antigen-Diagnostikums;
• Erkennen und identifizieren Sie ein unbekanntes Virus mithilfe eines bekannten Erythrozyten-Antikörper-Diagnostikums.

Vorteile von RNGA: hohe Empfindlichkeit, einfache Platzierungstechnik und Reaktionsgeschwindigkeit. Es ist jedoch wichtig zu beachten, dass bei der Erstellung einer stabilen Erythrozytendiagnostik große Schwierigkeiten auftreten (große Abhängigkeit von der Reinheit der verwendeten Komponenten, Notwendigkeit, für jeden Virustyp eine Art der Fixierung, Tanisierung und Sensibilisierung der Erythrozyten auszuwählen).

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Inhaltsverzeichnis zum Thema „Immunmodulatoren. Immundiagnostik von Infektionskrankheiten.“:

Detaillierte Agglutinationsreaktion (RA). Um AT im Blutserum des Patienten zu bestimmen, a ausgedehnte Agglutinationsreaktion (RA). Dazu wird einer Reihe von Blutserumverdünnungen ein Diagnostikum zugesetzt – eine Suspension abgetöteter Mikroorganismen oder Partikel mit sorbiertem Ag. Die maximale Verdünnung ergibt Agglutination Ag wird als Serumtiter bezeichnet.

Arten der Agglutinationsreaktion (RA) zum Nachweis von AT – ein Bluttropfentest für Tularämie (mit einem Diagnostikum, das auf einen Blutstropfen aufgetragen wird und das Auftreten sichtbarer weißlicher Agglutinate auftritt) und der Huddleson-Test für Brucellose (mit einem mit Enzianviolett gefärbten Diagnostikum, das auf einen Blutstropfen aufgetragen wird). Serum).

Ungefähre Agglutinationsreaktion (RA)

Um die isolierten Mikroorganismen zu identifizieren, wird eine ungefähre RA auf Glasobjektträger gelegt. Dazu wird eine Erregerkultur zu einem Tropfen Standard-Diagnostik-Antiserum (verdünnt 1:10, 1:20) gegeben. Bei positivem Ergebnis wird eine detaillierte Reaktion mit zunehmender Verdünnung des Antiserums durchgeführt.

Reaktion gilt als positiv, wenn eine Agglutination in Verdünnungen beobachtet wird, die nahe am Titer des diagnostischen Serums liegen.

OAS. Somatische O-Ags sind hitzebeständig und können 2 Stunden lang kochen. Bei der Wechselwirkung mit AT bilden sie feinkörnige Aggregate.

Gaul. N-Ag (Flagellaten) sind thermolabil und werden bei 100 °C sowie unter dem Einfluss von Ethanol schnell abgebaut. Bei Reaktionen mit H-Antiserum bilden sich nach 2-stündiger Inkubation lose große Flocken (die durch zusammenklebende Bakterien mit Flagellen entstehen).

Vi-Ar Typhusbakterien sind relativ hitzestabil (halten Temperaturen von 60–62 °C für 2 Stunden stand); Bei Inkubation mit Vi-Antiserum entsteht ein feinkörniges Agglutinat.

Direkte Hämagglutinationsreaktionen

Das einfachste davon Reaktionen - Agglutination rote Blutkörperchen oder Hämagglutination, die zur Bestimmung der Blutgruppen im ABO-System verwendet werden. Zu bestimmen Agglutination(oder deren Fehlen) Standard-Antiseren mit Anti-A- und Anti-B-Agglutininen verwenden. Die Reaktion wird als direkt bezeichnet, da die untersuchten Ags natürliche Bestandteile der roten Blutkörperchen sind.

Gemeinsam mit direkte Hämagglutination Die virale Hämagglutination verfügt über Mechanismen. Viele Viren sind in der Lage, Erythrozyten von Vögeln und Säugetieren spontan zu agglutinieren; ihre Zugabe zu einer Erythrozytensuspension führt zur Bildung von Aggregaten aus ihnen.